摘要：本文通過采用基本培養基、誘導培養基和植物激素試驗等探索利用菽北種茶外殖體進行快速組織培養的最適培養基．研究發現，用菽北種茶帶腋芽的莖段做為外殖體進行組織培養可獲得再生植株，並可建立快速無性繁殖係．實驗表明，芽增殖最適培養基為1 / 2Ms + BA1.0mg/L + IBA0.2mg / L ；生根壯苗最適培養基為l / 4MS + BA0.5mg / L + IBAO.1mg / L + A13+0.01mg / L ．此外，還探討了菽北種茶組織培養中褐變問題以及試管苗的移栽。
關鍵詞：菽北種茶；組織培養；培養基
菽北種茶是日本國內的優良品種占日本茶葉種植麵積的75 ％。菽北種茶1993 年從日本引種到我國，多年栽培表明，菽北種茶長勢好、產量高、製作的茶葉品質優，適宜在信陽等地推廣種植。日本政府禁止向我國出口種苗，所以我國藏北種茶的繁育問題顯得十分必要。目前，國內對該茶繁育方法的研究並不多。袁正仿等研究出一套有效的菽北種茶扡插繁育方法，但該茶的組織培養中培養基的研究鮮有報道。本試驗分別以菽北種茶的頂芽、節間和葉片為外殖體，探討不同取材部位及不同激素配比對誘導、增殖分化和生根壯苗的影響，選擇出了菠北種茶的最適誘導、增殖及生根培養基。本實驗為菽北種茶的繁育方法研究開辟了新的途徑，對菽北種茶的組織培養有一定指導意義。
1 材料和方法
1 . 1 實驗材料 取自信陽羅山藩新鄉和獅河區五雲二茶場
1 . 2 實驗方法選取菽北種茶的頂芽、葉片和一年生帶腋芽莖段做為外殖體。所有材料均采用自來水衝洗幹淨，在超淨工作台上用70％灑精浸泡1min ，然後放在0 . 1 ％的HgC12 溶液消毒3 次，時間分別為5min 、5min 、4min ，每次消毒後均使用無菌水衝洗四五次。消毒好的材料放在預先消毒過的濾紙上以除去水分，然後接人誘導培養基中。
1 . 3 培養條件基本培養基為Ms 培養基，pH 為5 . 8 ，蔗糖含量為3 % ，瓊脂含量為0 . 75 ％。接種後材料置於（25 土2 ）℃ 的培養室內培養，每天光照12h ，光照強度約為1 200lx。
2 結果與討論
2 . 1 基本培養基與芽苗形成的關係培養基是決定組織培養成敗的重要因素。實驗結果顯示，決定培養基效率的因子除激素外還有礦物質。為了確定適合菽北種茶芽苗生長的基本培養基，我們分別采用了Ms 、N6 和white 基本培養基和無機鹽，附加相同量的維生素、氨基酸、糖及植物激素，進行了比較試驗。實驗結果（表1）表明：菽北種茶外殖體在Ms 培養基中所形成的芽苗數及苗高度均優於其他兩種基本培養基，故此後的試驗均采用MS 做為基本培養基。
2.2 不同外殖體的誘導情況在培養基及其他條件相同情況下，為選擇合適的外殖體，用頂芽、節間和葉片3 種外殖體進行誘導比較試驗。結果（表2 滾明：由於頂芽在消毒過程中易受損傷，且在以後的培養過程中易褐化，所以誘導率較低。節間和葉片的誘導率都較高。雖然葉片在試驗中誘導較快，但在以後的培養中易汙染，主要是葉片比較粗糙，背麵有絨毛，不易徹底消毒。因此，節間做外殖體誘導較理想，以後的試驗均采用節間做外殖體誘導愈傷組織。
2 . 3 植物激素BA 和IBA 對增殖分化的影響 培養基中植物激素的狀況，在誘導植物組織形成器官過程中起著重要作用。將菽北種茶外殖體上長出的無菌苗剪下，培養在附加了細胞分裂素BA0.5~2.0mg/L 和生長素IBA0.1~0.3mg/L的分化培養基中。培養結果（表3 ）表明：BA 和IBA 有明顯促進芽苗形成作用，但濃度過高或過低都不利於芽的分化。當BA 濃度為0.1mg/L，IBA 濃度為0.2mg/L 配合使用時，分化率最高，增殖倍數也較大。當BA 和IBA 濃度繼續增大時，雖然增殖倍數還逐漸增大，但是分化率卻不變，莖反而逐漸縮短，葉極小。這種分化芽在以後的壯苗培養過程中，葉莖也不易伸長，從而影響了以後的生根培養和移栽。實驗結果表明，要既能達到繁殖目的，又能得到壯苗，以BA1.0mg / L + IBA0.2mg / L 為宜。另外還發現用1 / 2Ms 比Ms 培養的芽苗要好，可能是MS 中所含有的無機離子濃度較高，對芽苗的分化起到一定的抑製作用。
2 . 4 生根培養將高度為1.5cm 以上的無根芽苗轉到附加不同濃度BA 和IBA 的MS 培養基中誘導生根。實驗結果（表4 ）表明：誘導菽北種茶芽苗生根以l / 4MS + BAO . 5mg/L + IBA0.1mg / L + AI3+ 0.01mg/L 為好，其生根率達到67 % ，且苗健壯，為移栽成活創造了條件。實驗過程中用1 / 4 MS 比l / 2Ms 和Ms 效果都要好。如果在培養基中加人一定量的AI3+對生根有很大作用。實驗結果（表5 ）表明：生根率與AI3+的濃度有一定關係，AI3+的濃度過高或過低都不利於生根.一定濃度的AI3+對生根是必要的，但其生理原因還不清楚。
2 . 5 繼代培養 菽北種茶外殖體分化的芽每30d 轉接1 次，轉接二三次後將無根苗接人生根培養基中培養。30d 左右轉接1 次，培養三四代後形成完整植株，將獲得的完整植株用於試管苗的移栽。
2 . 6 試管苗的移栽當試管苗根長2.0cm 左右，根數二三條，苗高3 一5cm ，葉片4 ~ 6 片時，將瓶移到自然環境下煉苗4d 左右易成活。生根小苗從培養瓶中取出，用清水衝洗幹淨根部的培養基，栽於泥炭上做基質的培養袋中，澆透水，放人塑料大棚內，控製溫度25 ℃ 左右，濕度90 % , 20d 後移到自然環境中，注意澆水、施肥。菽北種茶試管苗移栽成活率達90 % ，目前移栽成活的試管苗生長良好。
2.7 褐變問題植物組織培養中，外殖體常褐變，特別是含酚類物質多的木本植物尤為突出。本實驗用2.0g/L的PvP 預處理外殖體，並在培養基中加入lg/L的活性炭溶液，擬防外殖體褐變，獲得較好效果。這就為菽北種茶組織培養研究中如何阻止褐變的問題提供了經驗和改進的路子。至於阻止菽北種茶褐變問題的生理依據還有待於進一步的研究。
3 結論
以菽北種茶的節間做為材料，在附加BA 2.0mg/L 的Ms 培養基上，誘導愈傷組織形成的效果最佳。在MS 培養基上附加BA1.0mg/L + IBA0.2mg/L ，生根效果最佳，並利於試管苗的移栽。當苗高3 一5cm ，每株根數二三條，根長2.0cm左右時，用泥炭土做基質，試管苗移栽易於成活。
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