紫萁組織培養的探討一

關鍵詞：紫萁；無菌培養；孢子粉
1 引言

紫萁(Osmunda Japonica Thunb．)是一種具有明顯世代交替的多年生蕨類經濟植物，無性世代時間長，切割分蔸進行無性繁殖操作難度大，功效低，繁殖係數不高．蕨類植物屬相對低等的較原始的類群，自然繁殖能力弱，是因為孢子萌發、原葉體形成、受精、孢子體形成與生長受到許多環境因素的影響，限製性因素難以在特定時間保證．何義發在田間運用“三段式”育苗培蔸方法，將孢子粉通過有性繁殖培育了孢子體幼苗．袁藝、田勝尼、張敏等都以紫萁孢子體作為外植體得到了試管苗．目前還沒有愈傷組織誘導成功的報道，但馬玉心等對薇菜的的另一個種分株紫萁進行了組織培養研究，成功地組織，並繼代、生根、得到試管苗，對紫萁愈傷組織的誘導很有借鑒意義．本文利用孢子粉和孢子囊兩種外植體，初步摸索出紫萁原葉體和幼孢子體階段的無菌培養條件，以期為紫其野生轉家種探討出一套科學的人工栽培技術提供理論基礎，為探索適用的快速繁殖技術，達到高效、低成本的目的提供技術支持．
2材料與方法

2．1試驗材料

試驗材料均於5月份采集孢子囊即將成熟但未散落的孢子葉，將孢子葉抖落於白紙上或剪下裝入紙袋中，自然後熟幹燥1-2 d，收集孢子粉．

2．2試驗方法

由於通過常規愈傷組織途徑很難誘導出愈傷組織，本試驗僅利用孢子萌發途徑探討紫萁的組織培養技術。

采用以下兩種方式：

a．取孢子囊完好的孢子葉小葉流水衝洗，於70％酒精和0．1％升汞溶液中浸泡，無菌水衝洗數次，切成0．5～lcm的小段，接種子附加不同激素的MS和1／2 MS培養基上，於25+_2℃，光照(40umol/s/m²，12 h／d)培養，30d後按下式計算孢子萌發率：

萌發率=孢子囊變綠並長出原葉體的孢子葉塊數／接種的孢子葉塊數×100％

b．將後熟散落的孢子粉於水杯中攪拌後靜置數分鍾，棄上層液和雜質，除去底部沉澱，再在經高溫滅菌的漏鬥濾紙中，用70％酒精和0．1％升汞分別過濾，達到時間棄去上層多餘的消毒液，無菌水浸洗數次，塗布於1／2MS培養基上．

以上所有基本培養基均添加2．O％蔗糖+O．6％瓊脂粉+200mg／LKH2P04+O．2％活性炭，pH=5．8．每次結果重複三次取平均值．

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