診斷急性新城疫的初步診斷，通常根據病史、臨床症狀和屍體剖檢即可作出。但溫和型新城疫較難作出確切診斷，在沒有神經症狀的情況下，可能與其它呼吸道疾病混淆，特別是在雞群中本來就有其它呼吸道感染時，則必須進行病毒分離或血清學診斷。(1)病料采集從感染後3～5天病禽的呼吸道分泌物或肺組織中，很易分離到病毒。全身症狀比較嚴重的病例，病毒很易從脾髒、血液中分離獲得。腦組織的病毒分離率較低。接種過疫苗的雞發生感染時，采集病料的時間應推遲至6～14天。(2)分離培養最好應用9～11日齡的雞胚。種蛋必須來自健康母雞，並且沒有新城疫抗體。將病料作尿囊腔接種，置37～38℃培養，每天照蛋，連續5天。強毒和中等毒力毒株常使雞胚在36～96小時死亡。雞胚全身充血，頭和翅等處出血，尿囊液清朗，內含大量病毒，呈現較高血凝性。弱毒株可能不使雞胚死亡，但雞胚液能凝集紅細胞。可疑病料如果不使雞胚死亡，不要輕易作出否定結論，應取雞胚組織在尿囊液中磨碎，製成懸液，繼續接種雞胚盲傳3代。在某些情況下需要接種易感小雞時，可通過呼吸道或肌肉接種。(3)檢查病毒抗原免疫組化技術能證明組織和器官中存在的特異性病毒或抗原，提供快速的診斷方法。氣管切片或壓片免疫熒光法和氣管切片免疫過氧化物酶法已應用於NDV感染的檢驗。也可應用細胞培養物分離NDV，最好是雞胚成纖維細胞或雞胚腎細胞。有些毒株在細胞培養物中不出現細胞病變。如作蝕斑檢查，覆蓋瓊脂中必須含有鎂離子和DEAE才能使某些毒株出現蝕斑。蝕斑出現於感染後24～72小時。(4)血清學家禽血清中的新城疫抗體可被多種試驗檢出，包括血凝抑製試驗、酶聯免疫吸附試驗、單相輻射免疫擴散、單相輻射溶血、瓊脂擴散、雞胚中和及蝕斑中和試驗。其中血凝抑製試驗是最常用的。酶聯免疫吸附試驗已普遍應用。作為雞群監測程序的一部分而進行血凝抑製試驗時，可采取待檢血清，與已知血凝性良好的NDV作試驗。尿囊液中可加入0.1%福爾馬林將病毒滅活。待檢血清作連續倍倍稀釋，每一稀釋度為0.25ml，與0.25ml已知病毒懸液(4個血凝單位)混合，靜置5分鍾後加入0.25ml0.5%～1%雞紅細胞。混合後置20℃～30℃經15～30分鍾觀察結果。當然也可在微量滴定板上進行微量血凝和血凝抑製試驗。鑒定病毒時，將感染尿囊液與已知抗血清作同樣檢查。血凝抑製試驗比中和試驗簡單快速。血凝抑製價在1：20以上者，肯定被檢雞過去患過新城疫或接種過新城疫疫苗。血凝抑製抗體在體內的持續時期比中和抗體短。對在細胞培養物中不產生細胞病變的毒株，可用血細胞吸附和血細胞吸附抑製試驗加以鑒定。中和試驗常用固定血清－稀釋病毒法。過去從未接觸過NDV的正常雞血清能中和高達100ID50的病毒，因此必須高於此值才能判為陽性。在10～20天前感染新城疫的雞，其血清通常能中和103～106ID50的病毒。NDV各毒株在抗原性上沒有區別，但是產生中和抗體的能力卻有差異。(5)病毒特性鑒定就NDV而言，普遍存在緩發型毒株，因而即使分離出NDV,也很難確診本病。為了確診，進一步作病毒特性鑒定，例如致病性試驗是必要的。A.致病性試驗由於以臨床症狀衡量病毒的真正毒力不一定可靠，有必要進行病毒致病性的實驗室評估。有3種體內試驗可用於此目的：①感染一個病毒最小致死量的雞胚平均死亡時間(MDT)；②一日齡雛雞腦內接種致病指數(ICPI)；③6周齡雞靜脈接種致病指數(IVPI)。現將一些特性明確的NDV毒株通過上述3種方法檢測取得的數值，列於表25-3。〖HT5SS〗B.體外致病性試驗如上所述，隻有NDV在F0的分裂位點上具有附加堿性氨基酸，胰酶蛋白酶等才可作用於F0,使其具有感染性。因此，NDV分離物在無胰酶的細胞培養上物形成蝕斑的能力，可成為一種簡單的體外檢查病毒毒力的方法。C.單克隆抗體NDV的單克隆抗體除用於常規診斷之外，在基本特性分析基礎上，可將單克隆抗體用於對分離物的鑒定和病毒分組。這種以抗原特異性為基礎的分型是診斷和流行病學分析的有力手段，能迅速分組和鑒別分離到的NDV。
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