副流感病毒3型

副流感病毒3型(Parainfluenzavirus,type3)

同義名：血細胞吸附病毒1型(Haemadsorptionvirus，type1)；運輸熱病毒(Shippingfevervirus)。〖HT5SS〗副流感病毒3型原始分離物稱為血紅細胞吸附病毒第1型，簡稱HA1病毒。它是1957年Chanock等從華盛頓1名患有急性呼吸道疾病的2歲患兒的咽拭子中，用猴腎細胞培養，根據紅細胞吸附現象分離出來的。患者血清對新分離病毒有4倍以上抗體增長。我國於1962年從急性呼吸道疾病的患兒咽喉拭子中用猴腎也分離到2株HA1病毒，在法國、英國、澳大利亞、加拿大和美國等也有地方分離獲得本病毒的報道。

(1)理化學特性病毒粒子的直徑為120～180nm，含單鏈RNA，核衣殼呈螺旋對稱，有外膜，含血凝素和神經氨酸酶。病毒的感染力和神經氨酸酶活性，在50℃30分鍾可降低約90%～99%。在無血清的營養液中，37℃24小時，99%以上的病毒被滅活，在5%血清中病毒較穩定。在4℃1天或幾天病毒感染力可保持不變，在-70℃可保持數月。相對濕度20%比80%更為穩定。用20%乙醚在4℃處理16小時可使病毒完全滅活，與等量氯仿在22℃處理10分鍾也可使其完全滅活。本病毒對熱的穩定性較其它副粘病毒為低，感染力在室溫中迅速降低，幾天後喪失殆盡。55℃30分鍾滅活，在-25℃能良好活存。血清對其具有保護作用，可以降低滅活速度。

(2)血凝性所有副流感3型病毒都能凝集人“O”型、豚鼠和雞的紅細胞。新分離的牛株比人株更易產生血凝作用。馬株凝集人和豚鼠的紅細胞，但對雞紅細胞的活性較差。根據對不同紅細胞的凝集作用和對熱的敏感性，牛株又可分為2～3個亞型。牛株尚能溶解雞或豚鼠的紅細胞。欲從細胞培養物中檢出新分離的毒株，以紅細胞吸附試驗最為敏感。

(3)抗原性與所有副流感病毒以及與其它副粘病毒之間都有交叉反應，但與正粘病毒沒有共同抗原。應用中和試驗、血凝抑製試驗、血細胞吸附抑製試驗、補體結合試驗和瓊脂擴散試驗，可將人株和牛株加以區分。

(4)培養本病毒能夠適應雞胚，羊膜腔接種時生長良好。雞胚液中產生血凝素。接種尿囊腔不能生長，這點與其它副流感病毒有別。新分離的病毒在細胞培養物中大多不能產生明顯的細胞病變和血凝素，但用血細胞吸附試驗容易檢出。連續傳代後可以產生細胞病變。牛株在犢牛、山羊、水牛、駱駝、馬和豬的腎細胞培養物以及HeLa和Hep－2細胞培養物中生長良好，並形成大的合胞體以及不同大小和形狀的嗜酸性胞漿內包涵體，核內也有圓形的單個或多個小包涵體。在每個包涵體的外周都有一層透明帶。新分離的馬株不易在雞胚羊膜腔內生長，在猴腎細胞培養物中第一代沒有細胞病變，培養10天可用血細胞吸附試驗檢出。連續傳代後，馬株可在雞胚細胞內良好生長，產生明顯的細胞病變，並形成嗜酸性胞漿內包涵體。在人羊膜細胞以及犬、豬和牛腎原代細胞、HeLa和犬腎傳代細胞中也能良好生長。將副流感病毒3型和新城疫病毒同時或先後接種同一個細胞培養物時，副流感病毒3型有增強新城疫病毒增殖和產生細胞病變的作用。

(5)病原性本病毒是幼兒呼吸道疾患的常見病因，常從喉炎、支氣管炎和肺炎的患者，特別是患病幼兒分離到病毒。成年人的呼吸道疾患由本病毒引起者少見。曾在捕獲的猴中，發現由本病毒引起的一次肺炎死亡率高達50%。本病毒常自“運輸熱”病牛中分離到。血清學研究發現，健康牛血清中存在本病毒抗體者甚為普遍，因此認為本病毒廣泛分布於世界各地。動物因受到不良因素的影響或因有其它微生物的協同作用而發病——自亞臨床感染到致死性肺炎。病毒也可使馬發生呼吸道疾病，在綿羊和羔羊中引起肺炎。曾從公牛精液和母牛生殖道中發現病毒，並可能導致不育。將牛株病毒實驗接種犢牛，根據接種途徑的不同，能引起發熱、結膜炎、粘液－膿性鼻炎或陰唇－陰道炎等。剖檢可在肺的肺葉發現大麵積充血和實變。鏡檢證明小支氣管和肺泡有炎症變化，上皮細胞融合，形成合胞體。胞漿內和胞核內都存在包涵體。本病毒對大多數實驗動物無致病性，豚鼠和倉鼠可經鼻接種感染，但無明顯症狀。

(6)診斷病料采集：病毒通常存在於呼吸道分泌物、鼻腔分泌物、氣管和肺組織。最好在感染後3～5天內用棉拭子采取鼻液。病毒分離培養、鑒定：分離牛株時最常用牛胚腎原代細胞；也可用牛腎、豬腎、貓腎、雞胚和猴腎細胞等，某些傳代細胞係也適用。接種後維持液應盡量避免加血清。病毒常產生細胞病變，在牛胚腎細胞培養物中能形成蝕斑。某些毒株產生的細胞病變不明顯且緩慢，以致很難與細胞單層的正常退化現象相區別。在這種情況下，應用血細胞吸附試驗常能較早地檢出病毒，即在接種後3天用豚鼠或牛紅細胞作試驗。還可用副流感3型抗血清作抑製試驗作進一步鑒定。此法迅速簡單。但某些毒株需在體外適應後，才能出現紅細胞吸附現象。在細胞培養物中分離獲得的病毒株，大多能夠凝集紅細胞，並可用抗血清進行血凝抑製試驗。血清學診斷：最常應用血凝抑製試驗和中和試驗。血凝抑製試驗可用試管法和微量法，前法的滴度比後法高1～2倍。將病毒培養於牛胚腎原代細胞製備抗原，當細胞病變明顯時收獲培養液，冷凍保存。待檢血清用高嶺土處理後，在56℃滅活30分鍾。快速診斷可用熒光抗體法或免疫酶技術。輕度感染的牛不出現臨床症狀，但血凝抑製滴度可達1∶40。感染後出現症狀的牛，其血清的血凝抑製滴度達1∶320～1∶640或更高。滴度為1∶10～1∶40時，證明過去有過感染，與最近發病可能沒有關係。由於抗體滴度在感染後2周升高，因此要檢查急性期和康複期雙份血清。如滴度增高4倍以上，即能肯定為最近感染。中和試驗的血清樣品用56℃滅活30分鍾。一般應用固定病毒－稀釋血清法。血清作1∶2～1∶256連續倍倍稀釋，病毒劑量為100～500TCID５０/0.1ml。血清和病毒各01ml，混合後室溫放置1小時，接種牛腎細胞培養物，35℃培養7天，中間檢查一次，觀察細胞病變或用豚鼠紅細胞作血細胞吸附試驗。人株和牛株之間有交叉反應，但同源血清的滴度較異源血清高。各地分離的牛株抗原性相同。