狂犬病病毒可在雞胚內增殖。應用5～6日齡雞胚作絨毛尿囊膜接種，病毒(特別是固定毒)可在絨毛尿囊膜和雞胚的中樞神經係統內增殖，病毒滴度上升，直至雞胚達12日齡，此後病毒滴度逐漸下降。狂犬病病毒可在原代雞胚成纖維細胞以及小鼠和倉鼠腎上皮細胞培養物中增殖，並在適當條件下形成蝕斑。但是必須指出，雖然許多種類的原代和繼代細胞都可支持狂犬病病毒的生長，但細胞培養物內的感染細胞較少，細胞病變不明顯，病毒產量甚低，這是因為狂犬病病毒具有較高細胞結合性的緣故。適應於雞胚成纖維細胞的毒株，如Flury毒株的LEP和HEP病毒，在細胞培養物中的病毒產量較高，可以用於製造疫苗。Kissling等由1958年開始，將狂犬病街毒及固定毒株在原代倉鼠腎細胞中連續傳代獲得成功。1960年，加拿大Fenje等用原代倉鼠腎細胞製成人用疫苗。以後又將倉鼠腎細胞毒株，分別適應於雞胚成纖維細胞及豬腎細胞。Atanasiu等應用小鼠脊管膜瘤細胞係於狂犬病街毒和固定毒的培養，觀察到細胞病變和胞漿內的涅格裏氏小體。BHK21細胞對狂犬病病毒極為敏感，產生明顯的細胞病變，並已成功地用於血凝素抗原的製備、細胞內狂犬病病毒合成及其形態的電子顯微鏡研究以及疫苗生產。Vero細胞也常用於動物狂犬病毒疫苗的生產。狂犬病病毒可在兔內皮細胞係中長期增殖，適於作病毒增殖和裝配等過程的觀察。培養液中存在免疫血清，並不影響病毒的細胞到細胞的傳播。但如免疫血清和補體同時存在，則可使感染細胞溶解。蝰蛇細胞係(VSM株)對狂犬病病毒甚為敏感，滴度可達107PFU/ml以上。人二倍體細胞如WI38、MRC5和HDCS株等，也常用於狂犬病病毒的培養。營養液內加入DEAEdextran(50μg/ml)，似可提高病毒的吸附和侵入率。接種病毒的組織培養細胞可用常規的單層或旋轉培養法培養，懸浮培養也已成功。培養液的最適pH為7.4～7.6，適宜溫度範圍為30～40℃，但低溫培養(32℃)尤為適宜。在研究狂犬病病毒在細胞培養物內的增殖周期時，發現BHK21細胞在感染後能夠繼續生長並分裂。應用熒光抗體檢查，可在胞漿內見到大塊的病毒特異抗原。因此，常采用同步接毒法培養病毒。而在其它細胞培養物內，則常隻能見到散在於整個胞漿內的小熒光顆粒。狂犬病病毒可在組織培養細胞內形成胞漿內包涵體。感染細胞培養物可能發生細胞溶解，但也經常發生慢性感染，雖然長期產生病毒，但細胞生長不受明顯影響。在雞胚成纖維細胞培養物內，即使是高度適應的Flury病毒HEP株，於接種後48小時，也隻1%左右的細胞的胞漿內含有病毒抗原。但在第6天，熒光細胞可能增加達100%。電鏡觀察，可在接毒後培養1天的細胞胞漿內看到均質性物質—毒漿，其中具有大量絲狀的核衣殼結構，隨後逐漸形成光學顯微鏡下可見的嗜酸性包涵體。包涵體內或在其附近見有大量的典型子彈狀病毒粒子(許多是沒有核心的中空粒子)。病毒粒子在胞膜或胞漿空泡膜上出芽成熟，同時獲得外膜(囊膜)。接種狂犬病病毒於乳鼠(小鼠或倉鼠)腦內，可以獲得高滴度的病毒，因此,乳鼠常被用於進行毒株的傳代。
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