狂犬病疫苗病毒分離

  取腦或唾液腺等材料用緩衝鹽水或含10%滅活豚鼠血清的生理鹽水研磨成10%乳劑，腦內接種5～7日齡乳鼠，每隻注射0.03ml，每份標本接種4～6隻乳鼠。唾液或脊髓液則在離心沉澱和以抗生素處理後，直接作接種用。乳鼠在接種後繼續由母鼠同窩哺養，3～4天後如發現哺乳力減弱，痙攣，麻痹死亡，即可取腦檢查包涵體，並製成抗原，作病毒鑒定。如經7天仍不發病，可殺死其中2隻，剖取鼠腦作成懸液，如上傳代。如第二代仍不發病，可再傳代。連續盲傳三代，第一、二、三代總計觀察4周而仍不發病者，作陰性結果報告。也可應用3周齡以內的幼鼠，如上作腦內接種，每隻0.03ml。這種日齡的小鼠通常在接種後15天內發病，主要症狀是肌肉震顫，步樣失調,麻痹，最後死亡。如有條件，可同時接種倉鼠腎原代細胞或倉鼠腎繼代細胞和BHK21細胞等。新分離的病毒可用電子顯微鏡直接觀察，或者應用抗狂犬病特異免疫血清進行中和試驗或血凝抑製試驗加以鑒定。中和試驗采用倉鼠腎細胞作細胞病變抑製試驗或蝕斑減數試驗，或者應用小鼠腦內接種法。即將標準免疫血清與新分離病毒進行試驗，如新分離病毒被已知狂犬病免疫血清所中和，則即證明新分離病毒為狂犬病病毒。具體方法請參閱本書第十四章有關節段。血凝抑製試驗應用以BHK21細胞培養的新分離病毒作為抗原。於0～4℃先測定其對鵝紅細胞的凝集滴度，以出現凝集的抗原最高稀釋度作為1個血凝單位。用4個血凝單位的被測抗原、標準陽性抗原及陰性抗原分別與不同稀釋度的標準血清感作後，再加0.25%鵝紅細胞。如果標準血清對待測抗原的抑製與其對標準陽性抗原的抑製價相同或相近，則即可作狂犬病病毒的陽性判定結果。