狂犬病疫苗血清學診斷

  主要用於疫苗效果檢查或流行病學調查，包括小鼠中和試驗、空斑減少中和試驗、血凝抑製試驗等。WHO推薦以快速熒光灶抑製試驗(RFFIT)代替小鼠中和試驗。試驗時血清樣品首先滅活，作倍比稀釋，同時設陰、陽性血清對照。病毒通常采用標準固定毒CVS株。細胞為BHK21細胞係，細胞濃度為10５/0.2ml。首先將稀釋的被檢及對照血清0.1ml分別加入96孔培養板中，再在各血清孔中分別加入0.1ml標準病毒稀釋液(100TCID５０)，混勻，37℃中和1.5小時；然後每孔加入10５細胞，於37℃5%CO２溫箱培養24小時，次日傾棄培養液，用pH7.60.01mol/LPBS洗一次，用3%冷丙酮液於-20℃固定10～１５分鍾，棄之，幹燥後，加熒光標記的抗狂犬病病毒IgG液,室溫感作30分鍾，餾水洗滌3次(5min/次)，再以0.1%伊凡思藍染色30秒，餾水洗滌3次(3min/次)。封載後鏡檢。在陰、陽性對照成立的基礎上，比較實驗組和陰性血清組的熒光灶，實驗組中能使熒光灶抑製大(等)於50%的血清最高稀釋度(倍數)，即為被檢血清的中和抗體滴度。一般情況下,陽性對照血清的起始稀釋效價為2IU/ml。待測抗體的單位，可通過計算待測抗體和標準血清滴度的比值得出。其公式：〖JZ〗待測抗體單位(IU/ml)=〖SX(〗待測血清IF抑製滴度〖〗標準血清IF抑製滴度〖SX)〗×2一般以0.5IU/ml判定為抗體陽轉的最低效價，即表示機體對狂犬病病毒感染具有抵抗力。此外，為了檢測動物體內的狂犬病病毒抗體，李金中等還報道了ELISA阻斷法，即先包被已知陽性抗原，用被檢血清與固定抗原感作，洗滌後，再加已知酶標記的陽性血清，洗滌顯色後，出現顏色反應則表明待測血清中無特異性抗體。未呈現顏色反應的樣品,說明血清中有狂犬病病毒特異性抗體，酶標抗體的結合被阻斷,因此判定為狂犬病病毒抗體陽性。此外，還有斑點免疫測定、對流免疫電泳、Western印跡等診斷方法，在此不一一贅述。在人畜被狗等動物咬傷後，不可將這些動物立即殺死，應關在鐵籠內飼養2～3周。如果動物在這幾周內不出現狂犬病的症狀，按照多年來通用的規定，可以認為此動物未患狂犬病。但如前述，由於近年來常在狂犬病疫區發現“頓挫型感染”，這些動物本身可能不出現狂犬病的症狀，但其唾液內含有病毒。應用上述血清學試驗作雙份血清檢查，可能有助於這些頓挫型患畜的檢出。