牛流行熱病毒診斷

  根據臨床症狀和流行病學資料，不難作出暫定診斷。牛流行熱發生於夏末秋初，短期內廣泛傳播，但隻發生於牛，特別是黃牛和奶牛。病牛明顯發熱，跛行或臥地不起，並有嚴重的呼吸困難，皮下常見氣腫。為了確診，可采病牛急性期血液或血沉管內的白細胞層，腦內接種乳鼠、乳倉鼠，常能分離到病毒。連續傳代常可使潛伏期不斷縮短：第一代約6～10天；第二代5天左右；至第6～8代，僅2～3天即可使乳鼠全部發病死亡。分離到病毒以後，即可應用乳鼠或細胞培養物與已知標準免疫血清進行中和試驗鑒定之。標準免疫血清通常以強毒人工接種犢牛而製得。效力測定時，將其與10-２稀釋的牛流行熱感染鼠腦等量混合，應對2～3日齡乳鼠有100%的保護力。陰性對照血清應對上述鼠腦毒10-5～10-6不呈現保護。將待鑒定病毒的感染鼠腦，以PBS作成10-2和１０－３兩個滴度，各以0.25ml分別加入等量標準免疫血清和陰性對照血清，並加青黴素1000U/ml、鏈黴素1000μg/ml。充分混合後，置4℃感作4小時，隨後分別腦內接種2日齡乳鼠，每組5隻，每隻0.02ml。如果標準免疫血清組乳鼠全部或大多活存，而陰性對照血清組乳鼠全部或大多死亡，則即可以證明待鑒定病毒就是牛流行熱病毒。國外曾報道用蚊細胞盲傳分離病毒。為了達到早期診斷的目的，也可利用分離的白細胞進行負染，作電鏡檢查確診。血清學檢查應用以感染鼠腦或經BHK21細胞克隆傳代的病毒製造的抗原，檢測病畜急性期和恢複期的雙份血清做中和試驗或補體結合試驗或間接免疫熒光試驗。Zakrzewski等(1994年)建立的檢測牛流行熱病毒特異性抗體的阻斷ELISA法，由於采用針對該病毒糖蛋白G1抗原位點的單克隆抗體，隻對牛流行熱病毒發生結合反應，而與相關病毒(如Berrimah,Kimberley病毒等)無交叉反應，因此與病毒中和試驗相比，敏感性更高，操作更簡單。是目前診斷及檢測臨床牛流行熱的最好方法之一。其操作原理是:首先包被抗原，然後加上1/8稀釋的待檢血清，空白對照加PBS,結合一定時間(2小時)後,棄去未結合抗體,加抗G蛋白G1抗原位點的生物素標記抗體,感作一定時間(1小時)，棄去未結合生物素標記抗體後，加親和素辣根過氧化物酶複合物感作後顯色。然後根據OD值計算待檢樣品孔中的百分抑製作用。