一、 培養皿的準備
1．配備與待測樣品數相同的無菌培養皿，另上一個作對照組（每種培養劑一個對照組），在每個培養皿上標上待測樣品的記號
2．用燒過的鑷子將無菌吸收墊從包裝袋中取出，放入每個培養皿中，每取一個吸收墊，鑷子需用火燒一次
3．打開培養皿蓋子到剛能加上約1.8ml的培養劑在吸收墊上，強烈建議使用裝有培養劑的小安瓿瓶、小瓶或小管，當處理大量樣品時，可使用無菌的吸管來分配培養劑
二、 培養劑的種類：
總菌數 橙血清培養劑
酵母和黴菌數 橙血清培養劑
大腸杆菌數 MF-Endo培養劑
糞便大腸杆菌數 M-FC培養劑
4應有足夠的培養劑加入每個培養皿，使過濾膜能適當地粘附著吸收墊。但過多的培養劑會引起菌落擴展重疊，常常得不到正確的計數結果。有需要時，建議調整推薦的培養劑數，以便粘附和菌落生長。
三.過濾器支架的準備：
1. 打開預先滅菌的過濾器支架或將過濾器座、漏鬥和漏鬥蓋在沸水中浸沒一分鍾作消毒。若沒有沸水，用95%酒精噴灑於漏鬥和漏鬥蓋，然後將其點燃，在火熄滅以後，讓過濾器冷卻至40℃以下，如果必須使用酒精，漏鬥必須用耐火材料製造。
2. 用水煮過或火焰滅菌鉗子，將無菌過濾器的底座部分安裝於過濾燒瓶或真空管道上。
3. 用火燒過的鑷子放一張無菌薄膜在過濾器底座上，根據測試目的，使用特定的過濾膜：
總菌數/大腸杆菌數：0.45um薄膜
酵母菌和黴菌：0.80um薄膜
4. 用水煮過或火焰滅菌鉗子，將過濾器漏鬥和漏鬥蓋放置於底座上。如漏鬥蓋帶有管口，則在管口處裝上過濾器，或予以封住。待過濾器的溫度低於40℃後才可加樣品。
5. 重複以上步驟，直到所有樣品都完成過濾。
四.樣品的過濾和平板培養
1. 無菌地將樣品直接倒入消毒和冷卻的過濾器漏鬥中。蓋上過濾器漏鬥的蓋子。若使用勺，須將勺放在95%的酒精的燒杯中。
2. 施加真空，使樣品通過薄膜。無菌地打開裝有無菌水的玻璃瓶，先用火燒螺紋處，然後倒入約20毫升無菌水於過濾漏鬥內，進行衝洗。施加真空，使無菌水通過薄膜。在過濾完樣品或無菌水後，不要讓真空施加時間連續超過30秒以上。
3. 用火焰滅菌鉗子從過濾器底座上取下薄膜。輕微提起裝有吸收墊和培養劑的培養皿的蓋子，並放下薄膜，直到鑷子相對側的薄膜邊靠到吸收墊邊為止。將薄膜貼在吸收墊上滾動，以排除氣泡。蓋上蓋子，在工作台上輕輕拍打培養皿，以驅除薄膜下麵的氣泡。
4. 作為對照組，用無菌水代替樣品重複上述過濾和平板培養程序。每一種培養劑須製備一個空白培養皿。
五.樣品培養
1.為了防止在過濾膜表麵形成冷凝水，所有培養皿必須倒置於培養箱中。
2.在培養箱中放置一燒杯水，以維持適當的濕度。
3.在以下溫度下培養可以得到最好的結果：
總菌數 35℃
酵母菌和黴菌數 28℃
大腸杆菌數 35℃
注：隻能使用一次性的培養皿，不能使用重複用的培養皿。
六.菌落數的計算
1. 總菌數
必須分別在培養24小時和72小時後計算菌數。點計所有菌落（不管類型），並記錄最高數目。
2. 酵母菌和黴菌數
在培養48小時後，計點酵母菌和黴菌數，並在此後每隔24小時再計點一次，直到過第五天，記錄最高數目。
酵母菌通常為圓形的白色菌落。有時他們也帶有顏色。在一天至兩天後，一些酵母菌菌落的中心因吸收培養劑而變成藍色。
黴菌菌落會顯示不同顏色（包括白色、黃色、紅色、藍色和黑色），但從“絨毛狀”或“棉花狀”外觀很容易辨認這種菌落。通常黴菌菌落比細菌或酵母菌的菌落為大。
細菌菌落通常比酵母菌更快吸收指示劑，而其顏色會變成藍色、綠色、藍綠色或褐色。再這種培養劑中，細菌菌落比一般酵母菌小。
3.大腸杆菌數
大腸杆菌菌落呈綠色或墨綠色，並有明顯的金屬光澤。在培養24小時後，隻計算有“金屬光澤”的菌落。
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