1、 設備和儀器
（1） 超淨工作台
（2） 冰箱（4℃）
（3） 恒溫箱：30±1℃、36±1℃、55±1℃
（4） 顯微鏡：帶油鏡頭
（5） 天平
（6） 接種環
（7） 滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、試管、吸管、平皿
（8） 白瓷搪缸
（9） PH電位計
（10） 酒精燈
2、 培養基和試劑
（1） 革蘭氏染色液
（2） 庖肉培養基
（3） 溴甲酚紫葡萄糖肉湯
（4） 酸性肉湯
（5） 麥芽浸膏湯
（6） 錳鹽營養瓊脂
（7） 血瓊脂
（8） 卵黃瓊脂
（9） 95%酒精溶液
3、 檢驗步驟
（1） 按取樣步驟取樣。
（2） 保溫：將樣品按照保溫試驗要求進行保溫，保溫過程中，每天檢查如有脹包或泄露等現象，立即取出開包檢測。
（3） 開包裝
取保溫過的樣品，冷卻到室溫後，開包檢查。
（4） PH值測定：
對每一包的樣品測PH值，看與標準樣是否有顯著的差異。
（5） 塗片染色鏡檢
塗片
對PH值檢查結果認為可疑的進行塗片染色鏡檢。用接種環挑取樣品塗於載玻片上，待幹後用火焰固定。
染色鏡檢
用革蘭氏染色法染色，鏡檢，至少觀察5個視野，記錄細菌的染色反應，形態特征以及每個視野的細菌。與同批的正常樣品進行對比，判斷是否有明顯的微生物增殖現象。
（6） 接種培養
保溫期間出現的脹包、酸包，或開包檢查發現PH值、感官質量異常，進一步鏡檢發現有異常數量細菌的樣品，均勻及時進行微生物接種培養。
對需要接種培養的樣品用滅菌移液管移出1ml內容物，分別接種培養，接種量為培養基的十分之一。所要求的55℃培養基，在接種前應在55℃水浴鍋中預熱至該溫度，接種後立即放入55℃溫箱培養。
低酸性產品接種培養、管數及培養條件見表1
|
培養基 |
管數 |
培養條件 |
時間（h） |
|
皰肉培養基 |
2 |
36±1℃（厭氧） |
96-120 |
|
皰肉培養基 |
2 |
55±1℃（厭氧） |
24 72 |
|
溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶導管） |
2 |
36±1℃（需氧） |
96-120 |
|
溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶導管） |
2 |
55±1℃（需氧） |
24 72 |
|
培養基 |
管數 |
培養條件 |
時間（h） |
|
酸性肉湯 |
2 |
55±1℃（需氧） |
48 |
|
酸性肉湯 |
2 |
30±1℃（需氧） |
96 |
|
麥芽浸膏湯 |
2 |
30±1℃（需氧） |
96 |
（7） 微生物 培養檢驗程序判定
（等同於6。11。1）
對有微生物生長的酸性肉湯和麥芽浸膏湯管進行觀察，並塗片染色鏡檢，按所發現的微生物類型判定。
（8） 樣品密封性檢驗
對確定有微生物繁殖的樣罐均進行密封性檢驗以判定該樣品是否泄露。
4、結果判定
（1） 該批產品抽取樣品經保溫試驗未脹、酸包或泄露；保溫後開包，經感官檢查、PH值測定或塗片鏡檢或接種培養，確證無微生物繁殖現象，則為商業無菌。
（2） 該批產品抽取樣品經保溫試驗有一包以上發生脹、酸包或泄露；或保溫後開包，經感官檢查、PH值測定或塗片鏡檢或接種培養，確證有微生物繁殖現象，則為非商業無菌。
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