4.2.1 共轉染的一般原則
1） 將線性化轉移載體和pAdEasyTM-1 DNA共轉化BJ5183必須要用高活性的感受態細胞。試劑盒中提供的細菌為電穿孔感受態，有很高的轉化效率。如果不用電穿孔法進行轉化，那麽必須製備化學敏感性感受態細胞，並在應用之前試驗其轉化活性（108已足夠）。
2） DH5α不可用於轉化，因其不支持重組，它隻是用來擴增重組病毒DNA。
3） 本實驗需要2ug線性化膠純化的重組轉移載體，共轉化和對照各需1ug。
4.2.2 共轉化方法
同時進行實驗組和對照組的轉化實驗：
實驗組共轉化：1ug線性化重組轉移載體（5ul）和1.0ul pAdEasyTM-1載體（100ug/ul）
對照組轉化：1ug（5ul）線性化重組轉移載體 _n YG;lf
1． 將BJ5183感受態細胞和電穿孔杯置於冰上。將細胞分為2管，每管40ul。
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2． 40ul感受態細胞中至多加入6ul DNA，且DNA必須溶於水，避免含有離子。
3． 將BJ5183轉入2mm電穿孔杯，防止有氣泡形成。
4． 按電穿孔供應商的使用說明轉化BJ5183，Bio-Rad儀器一般使用的參數為：200 Ohms、25uF、2.5KV；BTX儀器則為：5 Ohms、2.5KV、c=3.o
5． 用1mlLB重懸轉化物。
6． 轉入15~50ml離心管中，37℃震蕩培養60分鍾。
7． 將轉化物鋪3~5塊 LB/Kan（50ug/ml）培養板，37℃培養24小時。建議分別鋪100、300和600ul，以提高至少在一塊板中得到可分離菌落的機率，應該得到40~100個菌落。
8． 挑出24個最好的克隆，轉入2ml LB/Kan（50ug/ml）培養液中培養10~15個小時。不要儲存BJ5183培養液，因有可能產生非目的重組子。盡快抽提重組AdEasyTM質粒.
9． 用傳統堿裂解法小量製備質粒，取一半進行0.7%瓊脂糖凝膠電泳，驗證超螺旋質粒的大小。玻璃珠或樹脂製備質粒的試劑盒應避免使用，但粘粒DNA抽提試劑盒可以用。重組質粒大小約40kb，由於它是低拷貝質粒，所以小量製備時應相應調整具體操作。
4.2.3 預期結果
20%以上的菌落應含有大質粒（近40kb），這些是侯選重組子。與對照培養板生長的菌落進行對照即可大概估計線性化轉移載體再連接所致的背景強弱。由於在此高效重組recA+細菌中重組轉移載體會形成多聚體，因此背景將表現為一個梯度。
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