1.原理
質粒DNA粘附在細菌細胞表麵，經過42°C短時間的熱擊處理，促進吸收DNA。然後在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。
2．器材
旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml 微量離心管，雙麵微量離心管架，幹式恒溫氣浴（或恒溫水浴鍋），製冰機，恒溫搖床，培養皿（已鋪好固體LB-Amp），超淨工作台，酒精燈，玻璃塗棒，恒溫培養箱。
3．試劑
LB培養基（不加抗菌素），LB培養基（加抗菌素），無菌ddH2O，IPTG，X-gal。
4．實驗準備
無菌ddH2O，1.5ml離心管裝入鋁製飯盒（滅菌）、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒（滅菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
5．操作步驟
（1）事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
（2）從-70℃ 超低溫冰櫃中取出一管（100μl）感受態菌，立即用手指加溫融化後插入冰上，冰浴5~10min。
（3） 加入5μl連接好的質粒混合液（DNA含量不超過100ng），輕輕震蕩後放置冰上20min。
（4） 輕輕搖勻後插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然後迅速放回冰中，靜置3~5min。
（5） 在超淨工作台中向上述各管中分別加入500μl LB培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然後固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h。
（6） 在超淨工作台中取上述轉化混合液100~300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻（注意：玻璃塗布棒上的酒精熄滅後稍等片刻，待其冷卻後再塗）。
（7） 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液後再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻。
（8） 在塗好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表麵的液體都滲透到培養基裏後，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
（9） 在被細菌汙染的桌麵上噴灑70%乙醇，擦幹桌麵，寫實驗報告。
（10）觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
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