1. 未開封時，冷藏於≤8℃（≤46℉），並在保存期內用完，高溫度時，凝固水可以排除，包裝物最好於室溫啟開。
2. 已開封的，將封口以膠帶封緊。
3. 已啟開的包裝袋不要冷藏並於一個月內使用完。
4. 製備食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內，如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內
5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩衝旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩衝液. 因為它能抑止菌生長。
6. 攪拌或均質樣品.樣品的稀釋液調PH6.6-7.2對酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調PH。
7. 將測試片置於平坦表麵處，揭開上層膜。
8. 使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。
9. 細心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產生，切勿使上層膜直接落下。
10. 使用壓板（平麵底朝下）放置在上層膜中央處。
11. 輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋於圓形的培養麵積上，切勿扭轉壓板。
12. 拿起壓板，靜置至少1分鍾以使培養基凝固。
13. 測試片的透明麵朝上，可堆疊至20片。培養時間和溫度因方法而有不同，最通用的認可方法是：
總大腸菌群
● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳製品）
大腸菌群：32℃±1℃培養24±2h
● AOAC官方方法991.14（食品類）
大腸菌群：35℃±1℃培養24±2h
● NMKL方法（147.1993）
大腸菌群：37℃±1℃培養24±2h
● AFNOR認可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生貝殼類動物外的所有食品）
大腸菌群：30℃±1℃培養24±2h
耐熱的（糞）大腸菌群
● AFNOR認可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培養24±2h。當提高培養溫度時，培養箱應有一定的濕度是需要的。
14. 可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數，並可參考判讀卡計算菌落數。
15. 可以分離菌落作進一步鑒定，即掀起上層膜，由培養膠上挑取單個菌落。
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