1． 分析目標化合物
苯並噻二唑、苯並酸（苯並〔1,2,3〕噻二唑－7－羧酸）
2．儀器設備
帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀及液相色譜—質譜儀。
3．試劑
除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
磷酸緩衝溶液(pH8)： 第1液：稱取71.64g磷酸氫二鈉十二水和物，加水溶解至1,000mL 。第2液：稱取31.21g磷酸二氫鈉二水和物，加水溶解至1,000mL。將473.5mL第1液與26.5mL第2液混和，加水至1,000mL。
4．
標準品
苯並噻二唑：含苯並噻二唑99％以上，熔點為133℃。
苯並〔1,2,3〕噻二唑－7－羧酸(以下稱”苯並酸”)： 含苯並酸99％以上，熔點為261℃～262℃。
5．試驗溶液的製備
a 苯並噻二唑試驗溶液
① 提取方法
(I) 將樣品粉碎後，過420μm 標準網篩，稱取其10.0g，加入20mL磷酸緩衝溶液(pH8)，放置2小時。
加入100mL丙酮，攪拌3分鍾後，用塗布1cm 厚矽藻土的濾紙，抽濾至磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物，加入50mL丙酮和20mL磷酸緩衝溶液(pH8)，攪拌3分鍾後，按上述同樣操作，濾液合並於減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約50mL。
加入50mL 10%氯化鈉溶液，滴加約1mL 0.2mol／L 氫氧化鈉溶液，調整pH7.5～8.5 ，將溶液轉移至300mL分液漏鬥中。用100mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶，合並洗滌液於分液漏鬥中。用振蕩器激烈振蕩5 分鍾後，靜置，乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液，按上述同樣操作，合並乙醚和正己烷層於上述三角瓶中。
(II) 加入適量的無水硫酸鈉，不時振搖、混合，放置15分鍾後，濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液洗滌三角瓶，以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物，重複操作2次。合並兩次洗滌液於減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。
殘留物中加入30mL正己烷，轉移至100mL分液漏鬥中。加入30mL正己烷飽和的乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，靜置，轉移乙腈層於磨口減壓濃縮器中。正己烷層中加入30mL正己烷飽和的乙腈，按上述同樣操作，重複2次，合並乙腈層於減壓濃縮器中，40℃以下除去乙腈。殘留物中加入5mL乙醚：正己烷（3：17）混合溶液溶解。
② 淨化方法
在內徑15mm，長300mm 色譜管中，注入5g懸浮在正己烷中的柱色譜用合成矽酸鎂，其上再加入約5g無水硫酸鈉，放出正己烷至柱上端餘留少量正己烷。柱中注入a 提取方法所得的溶液後，加入50ml乙醚：正己烷(3：17)混合溶液，舍棄流出液。再加入150mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入乙腈：0.5％乙酸溶液的混合溶液溶解，準確至5mL，此為試驗溶液。
b 苯並酸試驗溶液
① 提取方法
按照a 苯並噻二唑試驗溶液中① 提取方法中（I）進行操作所得的水層中，加入0.5mL磷酸，使之成酸性。加入50mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，靜置，乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液，按上述同樣操作，合並乙醚和正己烷層於上述三角瓶中。加入適量的無水硫酸鈉，不時振蕩、混合，放置15分鍾後，過濾至磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液洗滌三角瓶,以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物，重複操作2次。合並2次洗滌液於減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入5mL乙酸乙酯：甲醇(4：1)混合溶液溶解。
② 淨化方法
在內徑15mm，長300mm色譜管中，注入5g懸浮在乙酸乙酯中的柱色譜用合成矽酸鎂，其上再加入約5g無水硫酸鈉，放出乙酸乙酯至柱上端餘留少量乙酸乙酯。將① 提取方法中所得溶液注入柱中後，注入50mL乙酸乙酯：甲醇(4：1)混合溶液，舍棄流出液。再加入200mL乙酸乙酯：甲醇（7：3）混合溶液，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去乙酸乙酯和甲醇。殘留物中加入0.5％乙酸溶液：甲醇（3：1）混合溶液溶解，準確至2mL ，此為試驗溶液。
6．操作方法
a 定性試驗
按照下列操作條件進行試驗。試驗結果必須與同樣操作條件下標準品的結果一致。
①苯並噻二唑的試驗
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠 (粒徑5μm)
柱： 內徑4.6mm、長150mm 不鏽鋼管。
柱溫： 40℃
檢測器： 波長254nm
流動相： 乙腈：0.5％乙酸溶液(2：3)的混合溶液。調整流速使苯並噻二唑14～16分鍾流出。
②苯並酸的試驗
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠(粒徑5μm)。
柱： 內徑4.6mm、長150mm 不鏽鋼管。
柱溫： 40℃
檢測器：波長235nm
流動相：0.5％乙酸溶液：甲醇(3：1)混合溶液，調整流速使苯並酸24～26分鍾流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的操作條件下所得試驗結果，用峰高法或峰麵積法定量，求出苯並噻二唑和苯並酸的含量，按照下式，求得含苯並酸的苯並噻二唑的含量。
苯並噻二唑(包括苯並酸)含量(mg/kg)＝A＋B×1.17
A：酸式苯並-S-甲基的含量(mg/kg)
B：酸式苯並酸的含量(mg/kg)
c 確證試驗
在與a 定性試驗相同的操作條件下，用液相色譜--質譜儀測定。試驗結果必須與標準品的一致。此外，必要時用峰高法或峰麵積法定進行量。
7．定量限
0.01 mg/kg
8．注意事項
分別對苯並噻二唑和苯並酸定量，將苯並酸含量乘以係數換算成苯並噻二唑的含量，其和為分析值。
