1．分析目標化合物
氮氨菲啶
2．儀器設備
帶可見分光光度檢測器的高效液相色譜儀。
3．試劑
甲醇
10％氯化鈉溶液
正己烷
乙酸乙酯
乙腈
甲酸銨： 特級
庚烷磺酸鈉： 1－庚烷磺酸鈉，特級
4．標準品
氯化氮氨菲啶：含氯化氮氨菲啶在99％以上，熔點為224℃～245℃
5．試驗溶液的製備
① 肌肉、脂肪、肝髒和腎髒：
肌肉：盡可能除去脂肪層，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
脂肪：盡可能除去肌肉層，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
肝髒、腎髒：攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，攪拌均勻，以每分鍾3000轉離心分離5分鍾，乙腈-甲醇層移入磨口減壓濃縮器中。在沉澱中加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，與上述同樣條件進行離心分離，合並乙腈-甲醇於磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈和甲醇。
殘留物中加入15mL乙酸乙酯和15mL水，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，棄去乙酸乙酯層。水層中加入15mL乙酸乙酯，用振蕩器激烈振蕩5分鍾，棄去乙酸乙酯層。水層中加入1g氯化鈉溶解，加入15mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中。水層加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，合並乙腈層於磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈。殘留物中加入1.0mL 0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液溶解，此為試驗溶液。
② 奶
稱取5.00g樣品，加入15mL乙腈和15 mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，以每分鍾3000轉離心分離5分鍾，乙腈-甲醇層移入減壓濃縮器中。在沉澱中加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，與上述同樣條件進行離心分離，合並乙腈-甲醇於磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈和甲醇。殘留物中加入15mL乙酸乙酯和15mL水，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，棄去乙酸乙酯層。水層中加入15mL乙酸乙酯，用振蕩器激烈振蕩5分鍾，棄去乙酸乙酯層。水層中加入1g氯化鈉溶解，加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，乙腈移入磨口減壓濃縮器中。水層加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鍾，合並乙腈於磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈，殘留物中加入1.0mL 0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液溶解，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠（粒徑5μm）。
柱：內徑4.0～6.0mm、長150mm不鏽鋼管。
柱溫：40℃
檢測器：波長380nm。
流動相：乙腈：含0.005 mol／L庚烷磺酸鈉的0.03mol／L檸檬酸溶液(3：7)的混合溶液。調整流速使氮氨菲啶約10分鍾流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的操作條件下所得試驗結果，峰高法或峰麵積法定量。
7．定量限
0.01mg/kg
8．注意事項
⑴ 試驗溶液的製備
提取和淨化使用的器皿必須是棕色的。
⑵ 標準溶液的製備
a. 標準品溶解在甲醇中作為標準原液（氯化氮氨菲啶108mg/L，氮氨菲啶100mg/L）。本標準原液在0℃～4℃保存，一周內穩定。
b. 用0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液，將標準原液遞減稀釋，作為製作標準曲線用的標準溶液。
⑶ 其它
用本檢測方法檢出氮氨菲啶時，最好用帶紫外可見多波長檢測器和質量檢測器的高效液相色譜儀確證。
上一篇：苯硫氨酯、奧芬達唑和苯硫苯咪唑檢測方法
下一篇：鏈黴素,二氫鏈黴素,壯觀黴素和新黴素檢測方法
