鏈黴素,二氫鏈黴素,壯觀黴素和新黴素檢測方法

1．分析目標化合物

二氫鏈黴素和鏈黴素 、壯觀黴素、新黴素                        

                                                                           2．儀器設備

高效液相色譜—質譜儀。

 

3．試劑

七氟丁酸：七氟正丁酸

庚磺酸鈉：1－庚磺酸鈉（特級）

1％的偏磷酸溶液

甲醇

 

4．標準品

硫酸二氫鏈黴素: 本品1.000mg含720µg以上效價的二氫鏈黴素。

硫酸鏈黴素:本品1.000mg含718µg以上效價的鏈黴素。

硫酸新黴素: 本品1.000mg含680µg以上效價的新黴素。

鹽酸壯觀黴素：本品1.000mg含603µg以上效價的壯觀黴素。

5．試驗溶液的製備

a 提取方法

①肌肉、脂肪、肝髒和腎髒

肌肉：盡可能除去脂肪，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。

脂肪：盡可能除去肌肉，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。

肝髒和腎髒：攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。

加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鍾後，以每分鍾3000轉離心分離10分鍾，脫脂棉過濾。

②奶

稱取5.00g樣品，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鍾後，用振蕩器激烈振蕩5分鍾，以每分鍾3000轉離心分離10分鍾，脫脂棉過濾。

③蛋

除去蛋殼，充分均勻後，稱取其5.00g，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌均勻後，以每分鍾3000轉離心分離10分鍾，脫脂棉過濾。

b、淨化方法

在十八烷基甲矽烷基化矽膠小柱(500mg)中，依次注入5mL甲醇和10mL水，舍去流出液。柱中依次注入a 提取方法所得到的溶液和5mL水，流出液中加入2mL 0.1mol／L庚磺酸鈉。柱中再依次注入5ml甲醇和10mL水，舍去流出液。依次注入前麵加入了庚磺酸鈉的溶液和5mL水，舍去流出液。柱中注入10mL甲醇，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去甲醇。殘留物中加入1.0mL乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液（1：9）混合溶液溶解，此為試驗溶液。

6、操作方法。

a 定性試驗

按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。

操作條件

柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠。

柱：內徑1.0～6.0mm、長10～150mm不鏽鋼管。

柱溫：40℃

流動相：乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液(1：9)混合溶液。調整流速使壯觀黴素約10分鍾流出。

b 定量試驗

根據與a 定性試驗相同的試驗條件所得的試驗結果，峰高法或峰麵積法定量。

7．定量限

二氫鏈黴素：0.02 mg/kg

鏈黴素：    0.02 mg/kg

壯觀黴素：  0.02 mg/kg

新黴素：    0.02 mg/kg

8．注意事項

（1）試驗溶液的製備

淨化方法采用的十八烷基甲矽烷化矽膠小柱，應預先采用標準品在保證確定的保持、溶出性能和淨化效果時，確證二氫鏈黴素定量限在0.02mg/kg以下；鏈黴素定量限在0.02mg/kg以下；壯觀黴素定量限在0.02mg/kg以下；新黴素定量限在0.02mg/kg以下。另外，用標準品進行添加回收試驗，確證十八烷基甲矽烷化矽膠小柱的淨化效果和回收率（90～100％）。

（2）標準溶液的製備

① 將相當於二氫鏈黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為二氫鏈黴素的標準原液（二氫鏈黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

②將相當於鏈黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為鏈黴素的標準原液（鏈黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

③將相當於壯觀黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為壯觀黴素的標準原液（壯觀黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

④將相當於新黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為新黴素的標準原液（新黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

⑤ 用甲醇遞減稀釋二氫鏈黴素、鏈黴素、壯觀黴素和新黴素各標準原液，作為製作標準曲線的標準溶液。