農藥殘留——氯惡草唑檢測方法

1．分析目標化合物

氯惡草唑、高氯惡草唑、惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈、CDHB〔6-氯－2,3－二氫苯並噁唑－2－酮〕

2、儀器設備

帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀（HPLC(UV)）。

液相色譜--質譜儀（LC/MS）

3、試劑

乙腈

氯化鈉

乙酸乙酯

正己烷

鹽酸

氯惡草唑標準品：含氯惡草唑98％以上，熔點為85℃～87℃。

4．試驗溶液的製備

1） 提取方法

① 穀類，豆類和種子類：

稱取10.0g，加入20mL水，放置2小時。

加入100mL乙腈，均質後，抽濾。濾紙上的殘留物中加入50mL乙腈均質後，按上述同樣操作，合並所得的濾液，40℃以下濃縮至約30mL。加入20g氯化鈉和100mL 0.5 mol/L鹽酸，分別用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液中加入無水硫酸鈉脫水，濾去無水硫酸鈉後，濾出液在40℃以下濃縮，除去溶劑。

殘留物中加入30mL正己烷，每次用30mL正己烷飽和乙腈溶液振蕩提取兩次。提取液在40℃以下濃縮，除去溶劑。

②水果和蔬菜

20.0g樣品中加入100mL乙腈，均質後，抽濾。濾紙上的殘留物中加入50mL乙腈均質，按上述同樣操作，合並所得的濾液，40℃以下濃縮至約30ml。加入20g氯化鈉和100mL 0.5 mol/L鹽酸，分別用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液在40℃以下濃縮，除去溶劑。

2）水解

在1）所得的殘留物中加入10 mL 0.5mol/L鹽酸，塞緊，不時振蕩混合，在50℃下加溫30分鍾。加入100mL 10％氯化鈉溶液，分別用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振蕩提取兩次。提取液中加入無水硫酸鈉脫水，濾去無水硫酸鈉，濾液在40℃以下濃縮，除去溶劑。

3）淨化方法

在2）水解所得的殘留物中加入5mL正已烷溶解。

在丙三醇丙醇甲矽烷基化矽膠小柱(360mg) （I）下麵連接三甲胺基丙基甲矽烷基化矽膠與苯碸酸甲矽烷基化矽膠混合小柱(600mg)（II）連接，注入10mL正已烷，舍棄流出液。柱中注入上述溶液，舍棄流出液。接著，依次注入10mL正已烷和30mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液，棄去各流出液，取下小柱（I），在小柱（II）中注入30 mL丙酮：正己烷（1：1）混合溶液，溶出液40℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物溶解在乙腈中，準確至1 mL，作為試驗溶液。但是，分析樣品為大豆、毛豆、豇豆時，用5mL正已烷代替乙腈溶解，用下述方法進一步淨化：在色譜管(內徑15 mm) 中注入5g懸浮在正已烷中的柱色譜用合成矽酸鎂，其上麵再裝入約5g無水硫酸鈉，放出正己烷至柱上端留有少量的正己烷。柱中注入上述所得的溶液，舍棄流出液，依次注入10mL正已烷和150mL丙酮：正己烷(1：19)混合溶液，舍棄各流出液。再注入150mL丙酮：正己烷(3：7)混合溶液，溶出液在40℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物溶解在乙腈中，準確至1mL，作為試驗溶液。

5．標準曲線的製作

將氯惡草唑標準品配製成100 mg/L的丙酮溶液，取其1mL，在室溫下通氮氣除去溶劑。殘留物與4．中2）同樣操作，其殘留物中加入乙腈溶解，至50mL。用乙腈稀釋此溶液，配製成0.1～2 mg/L氯惡草唑的丙酮溶液數點，分別注入20μL於 HPLC中，用峰高法或麵積法繪製成標準曲線。

6．定量試驗

注入20μL試驗溶液於HPLC中 ，根據5的標準曲線求出氯惡草唑的含量。

7．測定條件

1）HPLC

檢測器：UV (波長235 nm)

柱：十八烷基甲矽烷基化矽膠（粒徑5μm），內徑4.6mm、長250mm。

柱溫：40℃

流動相：乙腈：0.01 %三氯乙酸混合溶液，從(3：7)到(1：0)濃度梯度運行30分鍾。

保留時間標準：10分鍾

2）LC/MS

柱：十八烷基甲矽烷基化矽膠 （粒徑3μm），內徑 2mm、長 150mm。

柱溫：40℃

流動相：含有0.2 %乙酸的乙睛：0.2％乙酸混合溶液，從(3：97)到(97：3)濃度梯度運行10分鍾。

離子化方式：ESI(‐)

主離子： m/z 168、170

保持時間標準：10 分

8．定量限

0.05 mg/kg

9．注意事項

1）分析値

將氯惡草唑和惡唑禾草靈轉變成CDHB後，對CDHB 進行定量，其含量乘以係數換算成氯惡草唑的含量，作為氯惡草唑的分析值。氯惡草唑的分析值中，包括氯惡草唑、高氯惡草唑、惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈和CDHB。

2）檢測方法概述

本方法乙腈從樣品中提取氯惡草唑、高氯惡草唑和它們的代謝物惡唑禾草靈、高惡唑禾草靈和CDHB，轉溶到乙酸乙酯：正己烷的混合溶液中。水果、蔬菜保持原樣，穀類等用乙腈/正己烷分配脫脂後，用鹽酸水解，氯惡草唑和惡唑禾草靈轉變成CDHB。經丙三醇丙醇甲矽烷基化矽膠小柱、三甲胺基丙基甲矽烷基化矽膠與苯碸酸甲矽烷基化矽膠混合小柱和合成矽酸鎂柱淨化後，HPLC(UV)測定CDHB，LC/MS 確證。

3）注意點

① 用7所列的HPLC 測定條件，可以同時檢測氯惡草唑和惡唑禾草靈。CDHB的保留時間約10分鍾，惡唑禾草靈的保留時間約17分鍾，氯惡草唑約24分鍾。

② 按照4中2)所列示的操作，從氯惡草唑轉變CDHB的轉變率為95%。取得CDHB標準品時，繪製成CDHB的標準曲線，對CDHB定量，按下式求得氯惡草唑的含量。

氯惡草唑(包括惡唑禾草靈和CDHB)的含量= CDHB的含量×2.13

③ 按照這裏所示的定量限値，對低於基準值的農產品，可用再濃縮試驗溶液或增加樣品量等方法應對。

④ 對於高氯惡草唑，用本檢測方法能測定其水解生成的CDHB。

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