1．分析目標化合物
噠草特、噠草特羥基物、噠草特羥基物結合物
2、儀器設備
帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀。
3、試劑
丙酮
正己烷
嗎啉
乙酸乙酯
硫酸
無水硫酸鈉
0.2 mol／L乙酸銨緩衝液：將15.4g乙酸銨溶解在水中至1000mL，加氨水調節pH9。
4．標準品
噠草特：含噠草特99％以上，熔點為27℃。
噠草特羥基物：含噠草特羥基物99％以上，熔點為216℃~218℃。
5．試驗溶液的製備
a 提取方法
穀類、豆類和種子類：將樣品粉碎，通過420μm的標準網篩後，稱取其10.0g，加入20mL水，放置2小時。
蔬菜：準確稱取約1kg樣品，必要時定量加入適量水，攪碎混合均勻後，稱取相當於20.0g樣品的量。
加入120mL丙酮：0.2 mol／L乙酸銨緩衝液： 嗎啉（100：20：0.5）混合溶液，攪拌3分鍾後，用塗布1cm厚矽藻土的濾紙抽濾於磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物，加入50mL上述混合溶液，按上述同樣操作，合並濾液於減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約70mL。
將其移入預先注入50mL乙酸乙酯的200mL分液漏鬥（Ⅰ）中，用15mL0.2 mol／L乙酸銨緩衝液洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶，合並濾液於上述分液漏鬥中，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，靜置，水層移入200mL分液漏鬥（Ⅱ）中。加入50mL乙酸乙酯，按上述同樣操作，水層移入200mL三角瓶中。
b、水解
加入1mol／L硫酸調節pH4，裝上空氣冷凝管在60℃加熱40分鍾。冷卻後，移入200mL分液漏鬥中，用15mL蒸餾水洗滌三角瓶，合並洗液於分液漏鬥中。加入50mL乙酸乙酯，用振蕩器激烈振蕩5分鍾後，靜置，乙酸乙酯層移入200mL三角瓶中，水層中加入50mL乙酸乙酯，按上述同樣操作，合並乙酸乙酯層於上述三角瓶中。加入適量的無水硫酸鈉，不時搖蕩、混合，放置15分鍾後，濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙酸乙酯洗滌三角瓶，以此洗液洗滌濾紙上的殘留物，重複操作兩次。合並兩洗液於減壓濃縮器中，40℃以下除去乙酸乙酯。殘留物中加入1滴乙酸，用20mL丙酮：正己烷（1：9）混合溶液溶解。
c、淨化
① 合成矽酸鎂柱色譜法
在內徑15mm、長300mm色譜柱中注入5g懸浮在正已烷中的柱色譜用合成矽酸鎂，其上麵再裝入約5g無水硫酸鈉，放出正已烷至柱上端留有少量正已烷。柱中注入a 提取方法所得的溶液後，注入80mL丙酮：正己烷（1：9）混合溶液，棄去流出液，再注入60mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶液，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去丙酮和正己烷。殘留物中加入1滴乙酸，用10mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶液溶解。
②矽膠柱色譜法
在內徑15mm、長300mm色譜柱中注入5g懸浮在正已烷中的柱色譜用矽膠（粒徑630～200μm），其上麵再裝入約5g無水硫酸鈉，放出正已烷至柱上端留有少量正已烷。柱中注入①合成矽酸鎂柱色譜法所得的溶液後，注入10mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶液，棄去流出液。再注入100mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶液，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去丙酮和正己烷。殘留物中加入甲醇溶解，準確至1mL，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠（粒徑5μm）。
柱：內徑4～6mm、長150～250mm不鏽鋼管。
柱溫：40℃
檢測器：波長280nm。
流動相：甲醇：水：乙酸（4：6：0.05）混合溶液。調整流速使在13～14分鍾流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同試驗條件所得的試驗結果，用峰高法或峰麵積法對噠草特羥基物進行定量，其乘以係數1.83求得噠草特的含量。
7．定量限
0.01 mg/kg （油菜籽：0.05 mg/kg）。
8．注意事項
將噠草特和噠草特羥基物結合物轉變成噠草特羥基物之後，對噠草特羥基物進行定量，其含量乘係數換算成噠草特的含量，此為噠草特的分析值。
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