2.EB(Ethidium bromide,溴化乙錠)
溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑,用於觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標準302 nm 紫外光透射儀激發並放射出橙紅色信號,觀察瓊脂糖凝膠中DNA最常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色,溴化乙錠含有一個可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個三環平麵基團。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入後,其平麵基團與螺旋的軸線垂直並通過範德華力與上下堿基相互作用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近,導致與DNA結合的染料呈現熒光,其熒光產率比遊離溶液中染料有所增加。DNA吸收254 nm處的紫外輻射並傳遞給染料,而被結合的染料本身吸收302 nm和366 nm的光輻射。這兩種情況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590 nm處重新發射出來。由於溴化乙錠-DNA複合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20~30倍,所以當凝膠中含有遊離的溴化乙錠(0.5 μg/mL)時,可以檢測到少至10 ng的DNA條帶。溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導致錯配。溴化乙錠是強誘變劑,具有高致癌性!會在60~
溴化乙錠溶液的淨化處理:由於溴化乙錠具有一定的毒性,實驗結束後,應對含EB的溶液進行淨化處理再行棄置,以避免汙染環境和危害人體健康。
(1)對於EB含量大於0.5mg/mL的溶液,可如下處理:
①將EB溶液用水稀釋至濃度低於0.5 mg/mL;
②加入一倍體積的0.5 mol/L KMnO4,混勻,再加入等量的2.5 mol/L HCl,混勻,置室溫數小時;
③加入一倍體積的2.5 mol/L NaOH,混勻並廢棄。
(2)EB含量小於0.5 mg/mL的溶液可如下處理:
① 按1 mg/mL的量加入活性炭,不時輕搖混勻,室溫放置1小時;
② 用濾紙過濾並將活性碳與濾紙密封後丟棄。
3.DEPC
DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可滅活各種蛋白質,是RNA酶的強抑製劑。DEPC是一種潛在的致癌物質,在操作中應盡量在通風的條件下進行,並避免接觸皮膚。DEPC毒性並不是很強,但吸入的毒性是最強的,使用時戴口罩。不小心粘到手上注意立即衝洗,RNase Away TM試劑可以替代DEPC,操作簡單,價格低,且無毒性。隻需將RNase Away TM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表麵,浸泡後用水衝洗去除,即可以快速去除器皿表麵的RNase,並且不會殘留而幹擾後繼實驗。
上一篇:實驗室最危險的物質(一)
下一篇:細胞培養實驗室的基本設備