實驗目的：檢測病毒滴度
實驗原理：根據噬菌斑數計算病毒滴度
材料與試劑：
1、6孔板，12ml
離心管，100ml無菌玻璃瓶，無菌
吸管，70℃
水浴鍋，無菌水
2、杆狀病毒， SF9：5×105cells/ml
3、4% agarose gel：2g agrose + 50ml 水，高壓滅菌
4、2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen）+0.07gNaHCO3+H2O，調PH6.1，定容至100ml，無菌過濾
5、supplemented Grace：1×Grace添加3.33mg/ml Lactalbumin，3.33mg/ml yeastolate，無菌過濾
6、高溫滅活FBS
方法：
1、無菌條件下，2ml/孔細胞（5×105cells/ml）種入6孔板，室溫孵育1h使其貼壁，孵育後鏡檢其貼壁程度
2、將4% agarose gel放入70℃
水浴鍋融解，空100ml無菌瓶與2×Grace放入40℃
水浴鍋預熱
3、將杆狀病毒用無
血清supplemented Grace梯度稀釋：10
-1~10
-8
4、棄6孔板內上清，快速加入稀釋好的病毒，1ml/孔，複孔，室溫孵育1h
6、配置上層
瓊脂：加20ml高溫滅活FBS到2×Grace 100ml，25ml 2×Grace（含FBS）+12.5ml 無菌水+12.5ml 4% agarose gel，至預熱的100ml無菌瓶，輕輕混勻，放入37℃
水浴鍋備用
7、棄6孔板內上清，快速加2ml上層
瓊脂，以防菌層幹燥，靜置10-20min使其凝固
8、將6孔板放入27℃培養箱，培養4－10天
9、計數板中噬菌斑，直至連續兩天無變化，加1mg/ml中性紅0.5ml，室溫孵育2h後計數噬菌斑
注：
病毒滴度（pfu/ml）=1/稀釋倍數×噬菌斑數×1/每孔接種體積
上一篇：諾如病毒ELISA檢測
下一篇：柯薩奇病毒
