細菌檢驗工作的基本技術——腸杆菌科（上）

 

腸杆菌科雖然有100多個種，在臨床常見的不過是其中的一部分，約20餘種。從臨床標本中分離的頻率較高的是大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇異變形杆菌。對3個菌種的鑒別鑒定，實驗室可用常規的方法，一般不困難。其他菌種應按規程的操作從屬到種的步驟進行。

    (一)與其他科屬細菌的鑒別

    革蘭陰性杆菌除了腸杆菌科外，還有弧菌科和非發酵菌。所以，腸杆菌科的鑒定首先應注意與這些菌的鑒別。可用形態、葡萄糖氧化或發酵、氧化酶、鞭毛等特性加以區別，見表。

表      腸杆菌科與其他科菌的區別

注：*，不動杆菌、嗜麥芽黃單胞菌除外。

 

    可用兩個試驗將腸杆菌科初步分為二大類，即苯丙氨酸脫氨酶試驗和葡萄糖酸鹽試驗(也可用V-P試驗)，見表:

表       腸杆菌科初步分類

注：·有例外。

 

苯丙氨酸陽性、葡萄糖酸鹽陰性的有變形杆菌屬、普羅威登斯菌屬、摩根菌屬。

1．各屬的鑒別：變形杆菌屬、普羅威登斯菌屬、摩根菌屬的區別可用H₂S、鳥氨酸、枸椽酸鹽三個試驗，其鑒別見表:

表                   苯丙氨酸陽性的各屬鑒別

 

    2．變形杆菌屬種的鑒別：變形杆菌屬常見有三個種即普通變形杆菌、奇異變形杆菌、潘尼變形杆菌。產粘液變形杆菌僅從活的或死的吉普賽蛾幼蟲中發現，與人類的關係未見報道。鑒別見表。

表                      變形杆菌屬內種的鑒別

 

    3．普羅威登斯菌屬種的鑒別：該屬臨床常見有3個菌種，即產堿普羅威登斯菌、斯圖普羅威登斯菌、雷極普羅威登斯菌，其鑒別見表:

    表                       普羅威登斯菌屬內種的鑒別

 

    4．摩根菌屬的鑒定：摩根菌屬常見1個種，即摩根摩根菌，其鑒定見”苯丙氨酸陽性的各屬鑒別表”。

 

    1．葡萄糖酸鹽陽性各屬的鑒別：這類細菌有克雷伯菌屬、腸杆菌屬、沙雷菌屬、哈夫尼亞菌屬。可用動力、山梨醇、DNase、棉子糖等試驗將其區別(見表)。

表5-3-28   葡萄糖酸鹽陽性的各屬的鑒別

注：a．鼻硬結亞種、臭鼻亞種的某些菌株陰性。

       b．聚團腸杆菌陰性。

       c．芳香沙雷菌生物2群、普城沙雷菌、深紅沙雷菌陰性。

       d．解嗎氨酸克雷伯菌陽性。

 

2．克雷伯菌屬種的鑒別：克雷伯菌屬有肺炎克雷伯菌(亞種)、臭鼻亞種、鼻硬結亞種、產酸克雷伯菌。肺炎克雷伯菌和產酸克雷伯菌是臨床中分離較多的，二者的區別在靛基質。另外，兩個亞種雖然臨床不多見，但已從臭鼻患者、呼吸道慢性病患者以及鼻硬結患者中分離到，因此，鑒別它們也是有一定的臨床意義。可用甲基紅、賴氨酸、丙二酸鹽鑒別(見表5—3—29)。

表5-3-29   克雷伯菌屬種的鑒別

 

    3．腸杆菌屬種的鑒別：腸杆菌屬常見有 5個菌種：陰溝腸杆菌、阪崎腸杆菌、聚團腸杆菌、產氣腸杆菌、格高菲腸杆菌。在其鑒別上，氨基酸脫羧酶試驗的價值較大。阪崎腸杆菌、聚團腸杆菌可產生黃色素，為鑒定提供了較為明顯的特征。聚團腸杆菌還有一個特點，就是賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸皆為陰性。阪崎腸杆菌與陰溝腸杆菌的區別在於山梨醇，阪崎腸杆菌為陰性，陰溝腸杆菌為陽性。格高菲腸杆菌與產氣腸杆菌也很相似，可用尿素酶和山梨醇相區別。前者尿素酶陽性，山梨醇陰性；後者尿素酶陰性，山梨醇陽性。5個種的鑒別詳見表。

表5-3-30     腸杆菌屬種的鑒別

試  驗	陰溝腸杆菌	阪崎腸杆菌	聚團腸杆菌	產氣腸杆菌	格高菲腸杆菌
賴氨酸	-	-	-	+	+
鳥氨酸	+	+	-	+	+
精氨酸	+	+	-	-	-
山梨醇	+	-	-/+	+	-
尿素酶	+/-	-	-/+	-	+
黃色素	-	+	+	-	-

 

4．沙雷菌屬種與哈夫尼亞菌屬種的鑒別：沙雷菌屬有8個種，但臨床隻有粘質沙雷菌相對較多見，可用阿拉伯糖、木糖與其他沙雷菌相鑒別(見表)

表    粘質、液化沙雷菌的鑒別

 

哈夫尼亞菌屬隻有1個種，即蜂房哈夫尼亞菌，其特點是不分解乳糖(偶也有分解的，約5％)，發酵葡萄糖產氣，動力“+”，靛基質“一”，V—P“+”，枸櫞酸鹽“+”，H：S“一”，賴氨酸“十”，鳥氨酸“十”，山梨醇“一”，棉子糖“一”。該菌種的生化反應在25℃比較穩定，與其他菌屬的區別見前表5—3—22。

 

    (五)苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性的各屬及種的鑒別

    1．這一類菌屬有埃希菌屬、誌賀菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸杆菌屬、愛德華菌屬、耶爾森菌屬。他們的區別可用H₂S、動力、枸櫞酸鹽、靛基質、賴氨酸、尿素6個試驗相鑒別(見表5—3—32)。

表5-3-32    苯丙氨酸、葡萄糖酸陰性各屬的鑒別

注：·30℃以下培養有動力。

2．枸櫞酸杆菌屬種的鑒別：該屬常見有弗勞地枸櫞酸杆菌、異型枸櫞酸杆菌、丙二酸鹽陰性枸櫞酸杆菌等。三者的鑒別用靛基質、 H₂S、側金盞花醇(見表5-3-33)。

表5-3-33     枸櫞酸杆菌屬種的鑒別

試  驗	弗勞地枸櫞酸杆菌	異型枸櫞酸杆菌	丙二酸鹽陰性枸櫞酸杆菌
H2S	+/-	-	-
靛基質	-	+	-
側金盞花醇	-	+	-
丙二酸鹽	-/+	+	-
KCN生長	+	-	+

3. 愛德華菌屬，雖有3個種，但隻有遲緩愛德華菌具有臨床意義。其特點是不分解乳糖，分解葡萄糖產氣，產生H₂S，動力“+”，靛基質“+”，V-P“-”，枸櫞酸鹽“-”，賴氨酸“+”，鳥氨酸“+”，其他糖和醇皆“-”。與其他菌屬的區別見表5—3—22。

    4．埃希菌屬從臨床標本中常分離的是大腸埃希菌，靛基質“+”，甲基紅“+”，枸櫞酸“-”，但某些菌株動力“-”，遲緩發酵或禾發酵乳糖。不產氣的菌株與誌賀菌屬的區別見表5—3—34。出血性腹瀉的大腸埃希菌，其中最常見的為Ο157：H7型，研究也較清楚。該菌種對山梨醇不分解(35℃24～48h)。最後用血清學診斷方法確定。

表5-3-34            埃希菌種與其他菌種的鑒別

注：-，0～10％陽性；[-]，11％～25％陽性；d，26％～75％陽性；[+]，76％～89％陽性； +，90％～100％陽性；[-Y]，11％～25％產黃色素。

 

5．誌賀菌屬的鑒定：誌賀菌屬有4個種，臨床上一般用抗血清鑒定血清群、型。在用診斷血清鑒定之前，必須確定屬。有些大腸埃希菌生化特性不活潑，易與誌賀菌混淆，根據表5—3—34所列的生化學特性鑒別。

4種誌賀菌血清分群方法見有關產品說明。

6．沙門菌的鑒定：根據Bergey’s鑒定細菌學手冊第九版(1994年)登載，沙門菌屬分邦戈爾沙門菌(Salmonella bongori)和豬霍亂沙門菌(S．cho1eraesuis)。所有沙門菌屬 (包括亞利桑那菌)血清型皆屬上述二個種。邦戈爾沙門菌不到10個血清型，極其少見，而豬霍亂沙門菌有2 500以上血清型。

豬霍亂沙門菌再分6個亞種：亞利桑那亞種(subsp．arizonae)，豬霍亂亞種(subsp.  choleraesuis)，雙相亞利桑那亞種(subsp.diarizonae)，豪頓亞種(subsp. houtenae)，印第卡亞種(subsp. indica)，和薩拉姆亞種(subsp．salamae)。屬於豬霍亂沙門菌豬霍亂亞種的血清型皆已被命名，而其他亞種血清型沒有命名。其鑒別見表5—3—35。沙門菌的鑒定以抗血清凝集方法最方便。在凝集前必須確定屬。與本菌相似的有枸櫞酸杆菌和愛德華菌，可利用賴氨酸、靛基質、枸櫞酸鹽等試驗進行區別。鑒別方法參見表5-3-32。

    表5-3-35          沙門菌種、亞種、血清型的鑒別

注：-，0～10％；[-]，11％～25％陽性；d，26％～75％陽性；[+]，76％～89％陽性；+，90％～100％陽性。

 

沙門菌分型血清種類較多，依血清可將沙門菌分成2500個血清型。具體做法參見有關說明。

7．耶爾森菌的鑒定：耶爾森菌屬中隻有小腸結腸炎耶爾森菌較為常見。該菌與其他相應的菌屬鑒定要點有二：①尿素酶陽性；② 37℃動力陰性，300℃以下培養動力陽‘哇。借此可以與其他的腸杆菌科細菌相區別。小腸結腸炎耶爾森菌的其他特性見表5-3-22。