中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
微生物技術資料
文章檢索
  首頁 > 微生物知識->細菌基本知識和檢測方法->細菌檢驗工作的基本技術——弧菌屬

細菌檢驗工作的基本技術——弧菌屬



錄入時間:2010-7-14 9:35:45 來源：互聯網
弧菌屬（2010.07.14-3）
一、         常規鑒定
雖然弧菌屬內包含的菌種較多，但臨床實驗室常見到12個菌種，其中具有明確致病作用的有霍亂弧菌、副溶血弧菌、河弧菌、擬態弧菌等。
弧菌的鑒定分兩步，首先應與相近的菌屬區別，定屬後再做種的鑒定。
    1. 與相似的菌屬區別：弧菌屬歸弧菌科。同科中還有氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬，均為氧化酶陽性，發酵型。弧菌屬與其兩者的區別可依嗜鹽性、甘露醇、氨基酸及Ο/129(2,4-二氨基-6,7-二異丙基碟啶)敏感性等加以區別，Ο/129試驗用紙片濃度10μg、150μg二種，與紙片法藥敏試驗相同，出現抑菌環即判陽性(S)。
2．霍亂弧菌的鑒定：目前我國臨床細菌室對霍亂弧菌的鑒定一般隻作初步鑒定，具體方法如下：
(1)直接塗片
懸滴檢查：取患者糞便製成懸滴標本(亦可用壓滴法)，檢查細菌的動力。霍亂弧菌無論是古典生物型或El-tor生物型均呈現極活潑的穿梭狀運動。Ο1群霍亂多價血清製動試驗陽性，可作早期推測性報告。
表5-3-37           致病弧菌的生化特性(陽性百分率)

試    驗
霍亂弧菌
擬態弧菌
麥氏弧菌
霍利斯弧菌
海魚弧菌
河弧菌
弗尼斯弧菌
溶藻弧菌
副溶血弧菌
致傷弧菌
辛辛那提弧菌
沙魚弧菌
精氨酸
(1％NaCl)
0
0
60
0
95
93
100
0
0
0
0
0
賴氨酸
(1％NaCl)
99
100
35
0
50
0
0
99
100
99
57
100
鳥氨酸
(1％NaCl)
99
99
0
0
0
0
0
50
95
55
0
0
葡萄糖產氣
0
0
0
0
10
0
100
0
0
0
0
0
麥芽糖
99
99
100
0
100
100
100
100
99
100
100
100
甘露醇
99
99
96
0
0
97
100
100
100
45
100
50
水楊苷
1
0
9
0
0
0
0
4
1
95
100
0
蔗  糖
100
0
100
0
5
100
100
99
1
15
100
50
氧化酶
100
100
0
100
95
100
100
100
100
100
100
100
ONPG
94
90
50
0
0
40
35
0
5
75
86
0
硝酸鹽
99
100
0
100
100
100
100
100
100
100
100
100
0%NaCl
100
100
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
8％NaCl
1
0
44
0
0
71
78
94
80
0
62
0
Ο/129
99
95
90
40
90
31
0
19
20
98
25
100
枸櫞酸鹽
97
99
75
0
0
93
100
1
3
75
21
0

 
染色檢查：取米泔樣糞便的絮狀物、粘液部分塗片2張，幹燥後用乙醇固定，分別用革蘭染色及1:10稀釋的石炭酸複紅染色，幹燥後用油鏡檢查，觀察有無革蘭陰性、呈魚群樣排列的弧菌。塗片檢查，隻能對可疑患者作初步診斷參考，不能作確診依據。
(2)玻片凝集試驗：自分離平板上挑取可疑菌與霍亂多價診斷血清(即Ο1群霍亂多價血清)做玻片凝集試驗，所用血清的效價應在1：80～l：160之間，如過濃，則稀釋後再作凝集。將稀釋血清滴加在潔淨的載玻片上，挑取可疑菌落混於血清內，即刻(一般不超過 10s)出現肉眼可見的明顯凝集者為陽性。菌落應以生理鹽水作對照，對照應不發生凝集。為了提高陽性檢出率，應多挑可疑菌落進行玻片凝集試驗。作初步鑒定試驗後，將此高度疑似菌送衛生防疫站作最後鑒定。
霍亂弧菌是重要病原菌。由於病原學及流行病學方麵的需要，對Ο1群霍亂弧菌進一步分型是必要的。國際上公認通用的區分方法有兩種：①生物分型；②抗原分型。
生物分型：根據霍亂弧菌在生物學上的差異，分為兩個生物型，命名為古典生物型和 El-tor生物型。古典生物型的毒力往往大於 El-tor生物型。古典生物型菌株的染色體上帶有兩個毒素基因，而絕大多數El-tor生物型菌株僅有一個毒素基因。在霍亂病的防治中，對菌株進行生物分型是必要的。
兩種生物型的區分方法見表5-3-38。
     表5-3-38                 霍亂弧菌的生物分型

生物學特性
生物型
古典型
El-tor型
V-P試驗
-
+
溶血性
-
+
50U多粘菌素B紙片
S
R
雞血球凝集
-
+

 
抗原分型：霍亂弧菌的血清學分型是依據菌體抗原。古典生物型和El-tor生物型的抗原同屬Ο1群霍亂弧菌。
Ο1群的霍亂弧菌還可以進一步分血清型。依菌株是否具備A、B因子，分為小川、稻葉、彥島3個型別，血清分型見表5—3—39。
表5-3-39       霍亂弧菌生物分型和血清型

種
生物分型
血清型(Ο抗原因子)
霍亂弧菌
古典型霍亂弧菌
El-tor型霍亂弧菌
小川型（A、C）
稻葉型（A、B）
彥島型（A、B、C）

 
根據以上分型原理，鑒定致病性霍亂弧菌應遵循以下3個步驟：
    ① 可疑菌落與Ο1群抗血清凝集，確定是屬於Ο1群，還是非Ο1群弧菌。
    ② 與分型血清A、B凝集，確定血清型。
③ 作生化試驗進行生物分型，確定是古典生物型，還是El-tor生物型。
 
3．其他弧菌的鑒定：弧菌屬中除Ο1群霍亂弧菌多次暴發世界性流行霍亂病，非Ο1群中的Ο139群最近報告暴發霍亂流行。其他弧菌種，不僅與腹瀉有關，尚可引起腸外感染。分離出上述菌株應予以鑒定。本菌屬中致病的12個菌種其生物學特性參照表5—3—37所列及表5—3—40分群鑒定。表5-3-40       弧菌屬的分群鑒定

試    驗
1群
2群
3群
4群
5群
6群
霍亂弧菌
擬態弧菌
麥氏弧菌
辛辛那提弧菌
霍利斯弧菌
海魚弧菌
河弧菌
弗尼斯弧菌
溶藻弧菌
副溶血弧菌
致傷弧菌
沙魚弧菌
0％NaCl中生長
+
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
1％NaCl中生長
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
氧化酶
 
 
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
硝酸鹽
 
 
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
精氨酸
 
 
 
+
-
+
+
+
-
-
-
-
賴氨酸
 
 
 
 
-
 
 
 
+
+
+
+
鳥氨酸
 
 
 
 
-
 
 
 
 
 
 
 
肌醇
-
-
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-

 
鑒定中用0％NaCI生長、氧化酶、硝酸鹽、氨基酸及發酵肌醇等幾個試驗將上述12個菌種分成6個群。分群後，僅1群、5群和6群還需要繼續區分。
霍亂弧菌與擬態弧菌的區別方法可以用蔗糖發酵試驗，前者陽性而後者陰性(表5—3—37)。
第5群3個菌種的區別可依據甘露醇發酵和葡萄糖產氣試驗，3種細菌的反應特征見表5—3—37。
第6群的4個菌種的區別可依據水楊苷和蔗糖發酵試驗，4種細菌的反應特征見表5—3—37。
1992年10月發生在印度南方泰米爾納依邦(Tamilmadu)的Madas，分離到與Ο1群霍亂弧菌無關、命名為Ο139型霍亂弧菌，該菌的生物學特性符合霍亂弧菌，用Ο1群霍亂弧菌抗血清不能製動，綿羊RBC溶血反應不定，抗多粘菌素B(50U)和複方新諾明，抗Ο/129，對MukherjeeⅣ和V型噬菌體不敏感。血清學鑒定參照衛生部生物製品檢定所生產Ο139霍亂弧菌診斷用試劑盒說明書。
二、試驗方法
見腸杆菌科鑒定，其中氨基酸脫羧酶試驗培養基中必需含1％氯化鈉。
Ο/129敏感試驗：用含0.5％NaCl M-H瓊脂，如紙片法藥敏試驗相同接種被檢菌株，貼上含Ο/129 10μg／片、150μg／片，35℃孵育18h，記錄結果：
 

150μg／片
10μg／片
結果
有抑菌環
有抑菌環
S
有抑菌環
無抑菌環
S／R
無抑菌環
無抑菌環
R

 


 

 

上一篇：細菌檢驗工作的基本技術——腸杆菌科（下）

下一篇：古細菌及其特征、形態和生存環境

首頁 | 關於我們 | 網上商城 | 在線客服 | 聯係我們
業務聯係電話
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
郵箱：qdhbywg@vip.126.com
地址：青島市城陽區錦匯路1號A2棟
產品技術谘詢
  工作日(周一至周六8:00-18:00)：
  18562658263 13176865511
  其它時段：13105190021
投訴與建議：13105190021 13006536294