微生物菌種常規保藏技術規程（4）

附    錄C

沙土管保藏法

 

C.1   適用範圍

本方法適用於產孢類放線菌、芽孢杆菌、曲黴屬、青黴屬以及少數酵母如隱球酵母和紅酵母等。不適用於病原性真菌的保藏，特別是不適於以菌絲發育為主的真菌的保藏。

C.2   原理

幹燥條件下微生物菌種代謝活動減緩，繁殖速度受到抑製。此方法可減少菌株突變，延長存活時間。

C.3   方法與步驟

C.3.1   沙土管製備

將河沙用60目過篩，棄去大顆粒及雜質，再用80目過篩，去掉細沙。用吸鐵石吸去鐵質，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中有機物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時後倒去鹽酸，用水洗泡數次至中性，將沙子烘幹或曬幹。另取瘦紅土100目過篩,水洗至中性，烘幹，按沙∶土=  2∶1混合。把混勻的沙土分裝入安瓿管或小試管中，高度為1厘米左右。塞好棉塞，0.1MPa滅菌30分鍾，或常壓間歇滅菌3次，每天每次1小時。滅菌後在不同部位抽出若幹管，分別加營養肉汁、麥芽汁、豆芽汁等培養基，經培養檢查後無微生物生長方可使用。

C.3.2   斜麵培養物的製備

參照附錄A。

C.3.3   製備菌懸液

向培養好的斜麵培養物中注入3mL-5mL無菌水，洗下細胞或孢子製成菌懸液。用無菌吸管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2mL -0.5mL。放線菌和黴菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。

C.3.4   幹燥

用真空泵抽去安瓿管中水分並放置於幹燥器內。

C.3.5   純培養檢查

從做好的沙土管中，按10∶1比例抽查。無菌條件下用接種環取出少量沙土粒，接種於適宜的固體培養基上，培養後觀察其生長情況和有無雜菌生長。如出現雜菌或菌落數很少，或根本不長，則須進一步抽樣檢查。

C.3.6   保藏

將純培養檢查合格的沙土管用火焰熔封管口。製好的沙土管存放於低溫(4℃-15℃)幹燥處，半年檢查一次活力及雜菌情況。也可將純培養檢查合格的沙土管直接用牛皮紙或塑料紙包好，置幹燥器內保存。用此方法保藏時間為2-10年不等。

C.3.7   複活