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革蘭陰性杆菌分離培養基——腸杆菌分離培養基



錄入時間:2010-8-17 16:20:32 來源:青島betway必威西汉姆联

1 中國藍瓊脂

[用途]

分離腸道菌的弱選擇性培養基

[配法]

肉膏湯瓊脂(pH 7.4) 1L , 10g / L 中國藍溶液(滅菌)10 ml,乳糖10g , 10g / L 薔薇紅酸乙醇溶液10ml。取乳糖10g 置於已滅菌的肉膏湯瓊脂瓶內,加熱溶解瓊脂並混勻。待冷卻至50 左右,加入中國藍、薔薇紅酸乙醇溶液混勻,立即傾注平板,凝固後備用。

[用法]

將標本接種平板,置35 18-24h 。分解乳糖產酸的細菌,其菌落呈藍色;不分解乳糖的細菌,菌落為淡紅色的透明菌落。

[質量控製]

大腸埃希菌ATCC 25922 菌落呈藍色;痢疾誌賀菌IATCC 13313 和鼠傷寒沙門菌ATCC 13311 菌落呈淡紅色。

[保存]

4 冰箱保存,1 周內用完。

注:

(1)中國藍溶液需煮沸或115 滅菌15min後應用。薔薇紅酸乙醇溶液無需滅菌,但加熱時應避開火焰

(2)薔薇紅酸能抑製革蘭陽性細菌生長,但對大腸埃希菌沒有抑製作用,標本接種量不直太多

(3)此培養基pH7.4 ,應呈淡紅色。若過堿呈鮮紅色,過酸則呈藍色,均不適用。2 木糖、賴氨酸、去氧膽酸鹽(XLD )培養基

[用途]

為腸道菌選擇性培養基

[配法]

酵母浸膏3g , L-賴氨酸5g,氯化鈉5gD-木糖3.75g,乳糖7.5g,蔗糖7.5g,去氧膽酸鈉2.5g,硫代硫酸鈉6.8g , 枸椽酸鐵錢0.8g ,瓊脂13.5g1 %酚紅溶液8ml,蒸餾水1L

將上述成分(酚紅除外)混合,加熱溶解,校正pH 7.2 ,再加入酚紅溶液混勻。121 高壓滅菌15min 傾注平板備用。

[用法]

將標本劃線接種平板,置35 培養18-24h 。大腸埃希菌、腸杆菌屬、克雷伯菌屬、枸椽酸杆菌屬細菌可形成黃色、不透明菌落;大多數沙門菌屬細菌因不利用糖類,為半透明紅色或無色菌落。

[質量控製]

大腸埃希菌呈黃色菌落;宋內誌賀菌呈無色菌落;傷寒沙門菌呈紅色菌落有黑心;金黃色葡萄球菌抑製生長。

[保存]

貯存於4 有效期5 天。

3.SS 瓊脂

[用途]

沙門菌屬和誌賀菌屬(Salmonella-Shigella )的分離培養

[配法]

月示腖5g ,牛肉膏5g ,乳糖10g ,瓊脂巧15-20g ,膽鹽(No.3 ) 3.5g,枸椽酸鈉8.5g,硫代硫酸鈉8.5g,枸椽酸鐵1g , 1 %中性紅溶液2.5ml0.1 %煌綠溶液0.33ml,蒸餾水1L

將上述成分(除中性紅、煌綠外)混合於水中,加熱煮沸溶解,校正pH 7.0-7.1 ,然後加入中性紅和煌綠溶液,充分混勻冷卻至50 時傾注平板。

[用法]

將標本接種平板,置35 培養18-24h 。沙門菌屬菌落呈無色半透明,產生硫化氫者菌落中心呈黑色;誌賀菌屬的菌落呈無色半透明;大腸菌屬呈紅色渾濁;宋內誌賀菌能延緩發酵乳糖,培養24h 後可以出現紅色菌落。腸道致病菌的菌落直徑均可達1.5mm以上。

[質量控製]

大腸埃希菌菌落呈紅色;痢疾誌賀I型、福氏誌賀菌和傷寒沙門菌生長良好,菌落無色;腸炎或豬霍亂沙門菌菌落呈黑色;糞腸球菌、金黃色葡萄球菌不生長。

[保存]

避光,3 天內用完。

注:

煌綠要新配,中性紅要優質。

4 麥康凱瓊脂

[用途]

麥康凱瓊脂(Maconkey agar)用於腸道致病菌的分離培養和非發酵細菌鑒別。

[配法]

蛋白腖20g,氯化鈉5g,膽鹽(豬、牛、羊)5g,乳糖10g ,瓊脂15-20g , 1%中性紅溶液5ml,蒸餾水1L

將上述成分(除中性紅外)稱量加入水中,加熱溶解,校正pH 7.2 ,加入中性紅溶液,分裝滅菌115 20min ,冷卻至50 左右時傾注平板。

[用法]

取標本或增菌培養物接種平板,置35 培養18-24h 。不發酵乳糖的腸道細菌呈無色菌落,直徑約2.0mm左右,光滑半透明。

[質量控製]

大腸埃希菌菌落呈桃紅色;痢疾誌賀菌菌落呈無色;傷寒沙門菌菌落無色;金黃色葡萄球菌不生長。

[保存]

4 冰箱(避光), 1 周內用完。

注:非發酵細菌在該平板上是否生長,是臨床鑒定某些非發酵細菌的指標之一。5 伊紅美藍瓊脂

[用途]

用於腸道致病菌及大腸菌群分離培養

[配法]

蛋白腖10g ,乳糖10g ,磷酸氫二鉀2g , 20g / L 伊紅Y 溶液20ml6.5g / L 美藍溶液10ml,瓊脂17g ,蒸餾水1L

將蛋白腖、磷酸鹽、瓊脂稱量混合於水中,並加熱煮沸溶解,校正pH 7.1 ,分裝121 滅菌15min備用。臨用時加熱溶化瓊脂加入乳糖,冷至50-55 時加入伊紅和美藍溶液,搖勻傾注平板。

[用法]

取糞便標本或增菌培養物接種平板,置35 培養18-24h 。根據檢驗目的不同,挑取無色菌落或挑選紫紅色及有金屬光澤的菌落轉種克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進行鑒定。

[質量控製]

大腸埃希菌菌落呈紫紅色,有時有金屬光澤,直徑>2.3mm;傷寒沙門菌菌落呈灰白色,直徑>1.8mm;金黃色葡萄球菌不生長。

[保存]

4 冰箱,1 周內用完。

6 氏雙糖鐵瓊脂

[用途]

克氏雙糖鐵瓊脂(Klinger iron agar)用於腸杆菌科細菌的初步鑒定。

[配法]

蛋白腖20g ,牛肉膏3g ,酵母膏3g ,乳糖10g ,葡萄糖1g ,氯化鈉50g ,枸椽酸鐵銨0.5g,硫代硫酸鈉0.5g0.2 % 酚紅溶液5ml,瓊脂12ml,蒸餾水1L

將前8種成分稱量混合於水中,加熱溶解,校正pH 7.5 ,再加入瓊脂和酚紅溶液,煮沸溶解分裝試管每管4ml,經115 滅菌20min ,立即製成高層斜麵,待凝固後經無菌試驗備用。

[用法]

取待檢菌純培養物,用接種針作底層穿刺和斜麵劃線接種,置35 培養18-24h ,觀察結果。斜麵變黃,底層變黃,產氣者或不產氣者多屬大腸埃希菌群及發酵乳糖的菌株。斜麵變紅,底層變黃,為不發酵乳糖菌株。產硫化氫菌株可使底層或全管產生黑色反應。

[質量控製]

奇異變形杆菌K / A 硫化氫陽性;大腸埃希菌A / A ;誌賀痢疾杆菌K / A ;傷寒沙門菌K / A 硫化氫陽性;銅綠假單胞菌K / K

[保存]

4 冰箱,2 周內用完

注:該培養基pH 值尤為重要,pH 7.5 時使用效果最佳

7.三糖鐵瓊脂

[用途]

用於腸杆菌科細菌初步生化鑒定。

[配法]

蛋白腖15g,月示腖5g ,牛肉膏3g ,酵母膏3g ,乳糖10g ,蔗糖10g,葡萄糖1g ,氯化鈉5g,硫酸亞鐵2g / L 硫代硫酸鈉0.3g , 0.2 %酚紅溶液5ml,瓊脂12g ,蒸餾水1L

將前10 種成分稱量混合於水中,加熱溶解後校正pH 7.4 ,再加瓊脂及酚紅溶液,加熱煮沸溶解。分裝試管,每管4ml,經115 滅菌20min ,立即置高層斜麵,待凝固後,經無菌試驗備用。

[用法]

取待檢菌純培養物,用接種針作底層穿刺和斜麵劃線接種,置35 培養18-24h 觀察結果。發酵乳糖或蔗糖的菌可使斜麵及底層均變黃色。不發酵乳糖和蔗糖的細菌僅發酵葡萄糖時使底層變黃,斜麵變紅。產生硫化氫的菌株可使底層或整個培養基呈黑色。分解乳糖或蔗糖後產氣時有些菌株還能使培養基斷裂。

[質量控製]

傷寒沙門菌K / A ,硫化氫陽性;副傷寒沙門菌K / A ,硫化氫陽性;痢疾誌賀菌K / A ;大腸埃希菌A / A ; 普通變形杆菌A / A ,硫化氫陽性;銅綠假單胞菌K / K

[保存]置4 冰箱,2 周內用完

注:該培養基pH 7.5 時使用效果最佳

8.山梨醇麥康凱瓊脂

[用途] 用於致病性、侵襲性和產毒性大腸埃希菌分離培養]

[配法]

蛋白腖5g,月示腖3g ,氯化鈉5g,膽鹽(豬、牛、羊)5g,山梨醇10g ,瓊脂粉12g 0.1g / L 結晶紫溶液lml5g / L 中性紅溶液5 ml,蒸餾水1L

將前4 種成分混合於水中,加熱溶解,校正pH 7.2 ,再加入瓊脂粉加熱煮沸溶解。分裝三角燒瓶100 ml121 15min 滅菌備用。臨用時,加熱溶解,再加山梨醇、結晶紫及中性紅溶液,搖勻傾注平板。

[用法]

將標本或增菌液接種平板,置35 培養18-24h 。與麥康凱瓊脂不同之處是挑取致病性大腸埃希菌菌落時以無色菌落為主,同時兼取紅色菌落,如EPEC 遲緩分解山梨醇,菌落呈紅色。EHEC 0157H7菌落無色。

[質量控製]

參照麥康凱瓊脂

[保存]

4 冰箱,1 周內用完。

 

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