1 軍團菌培養基
緩衝活性炭酵母瓊脂培養基(BCYE )
[用途]
用於嗜肺軍團菌的分離培養
[配法]
酵母浸液10g ,活性(NoritSG ) 2g , L-半胱氨酸鹽酸鹽0.4g ,可溶性焦磷酸鐵鹽0.25g,瓊脂17g , N-2- 乙酰氨基-乙氨基乙醇磺酸(ACES ) 10g,蒸餾水80ml。
上述成分除半膚氨酸及焦磷酸鐵外,其餘成分混合加熱溶解,經121 ℃ 15min滅菌,放水浴中冷卻到50 ℃ 。另外分別配新鮮L- 半胱氨酸溶液(10ml蒸餾水中含0.4g)及焦磷酸鐵溶液(10ml含0.25g ) ,分別過濾除菌,再加入已滅菌瓊脂中,加入1mol/L 氫氧化鉀溶液4-5ml使培養基的最終pH 為6.9 -7.0 ,可用1mol/L 鹽酸溶液校正,傾注平板,冷卻後置4 ℃ 冰箱備用,亦可製成斜麵,用於保存菌種。該培養基為黑色。
[用法]
液體標本可直接接種培養基,肺、肝、脾等固體標本須製成100g / L 懸液後再接種培養基,接種後的培養基置35 ℃ 需氧環境培養,培養箱需保持一定的濕度。每天用解剖鏡檢查平板培養物,用略大於100 角的斜射光源照明。在BCYE 平板上,培養4-5 天,菌落直徑約1-2mm,並出現亮藍和切削玻璃樣的構造;繼續培養後菌落增大呈黃綠色,較光滑。
[保存]
在室溫、暗室中可保存1 周
2 彎曲菌選擇性培養基
( l ) Skirrow 's 培養基
[用途]
用於空彎及幽門螺杆菌分離培養
[配法]
蛋白腖5g,胰蛋白腖5g,酵母膏5g,氯化鈉5g,瓊脂粉12g ,萬古黴素10ml ,多粘菌素B 2500U , TMP5mg脫纖維羊血70ml ,蒸餾水930mL
除血和抗生素外,其餘成分混合於水中,加熱溶解,調pH 至7.2 , 121 ℃ 滅菌15min 待冷至50℃ 時加入羊血7ml和多抗液0.5ml,搖勻,傾注無菌平板。
[用法]
將標本接種平板,置25 ℃ 或43 ℃ 微需氧環境中培養48h ,菌落直徑達1-2mm ,為不溶血的菌落
[質量控製]
大腸埃希菌ATCC 25922和糞腸球菌ATCC 33186 不生長;空腸彎曲菌胎兒亞種ATCC 29424 生長良好。
注:
l )多抗液的配製:① 乳酸62mg (約2 滴)加入100ml 滅菌水中,然後加入TMP100mg ,混合加熱100 ℃ 滅菌。② 取① 液5ml ,再加萬古黴素100mg 和多粘菌素B 0.38mg ,搖勻後即可
2 )彎曲菌屬係微需氧菌,培養時可提供5 %氧氣及10 %二氧化碳。高濃度氧不利於細菌生長,尤其是幽門螺杆菌。因此標本采集後,應盡決接種培養,或置運送培養基中運送
3 )彎曲菌運送可用布氏菌湯培養基
( 2 ) Campy -BAP 培養基
[用途]
用於分離培養彎曲菌。
[配法]
蛋白腖10g ,胰腖10g ,葡萄糖10g ,酵母浸膏3g ,氯化鈉5g,重亞硫酸鈉0.1g ,蒸餾水900ml ,脫纖維羊血100ml ,萬古黴素10mg ,多粘菌素B 2500U, TMP 5mg ,兩性黴素B 2mg
將上述成分(除羊血和抗菌補充劑外),加入900ml 蒸餾水,加熱溶解,調pH 至7.2 後分裝,121 ℃ 滅菌15min ,加入羊血和抗菌藥物添加劑,充分混勻後傾注於無菌平皿內。
[用法]
取標本接種於平板,置25 ℃ 或43 ℃ 微需氧環境中培養48h ,菌落直徑達1-2 mm ,不溶血
[質量控製]
大腸埃希菌ATCC 25922 不生長;糞腸球菌ATCC 33186 不生長;空腸彎曲菌胎兒亞種ATCC 29424 生長良好
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