其它生化試驗培養基 （下）

[用途]

用於弧菌屬的鑒定

[配法]O／129  50mg溶於50ml無水乙醇中，取1ml加入100 片直徑6mm的無菌濾紙片中，吸收後於37℃ 烘幹備用。每片濾紙含O / 129 10μg。

[用法]

將待檢菌的肉湯塗布於堿性瓊脂平板，取O / 129 紙片貼於平板上，35 ℃ 培養18-24h 。平板出現抑菌圈為陽性，無抑菌圈為陰性。

[質量控製]

創傷弧菌陽性；親水氣單胞菌陰性

7.pH9.6 肉湯培養基

［用途］

用於鑒定鏈球菌

[配法]

pH9.6 的肉湯100ml ，葡萄糖2g / L。

將普通肉湯調整pH9.6 ，加入葡萄糖溶解後，分裝試管，每管2-3ml，121 ℃ 滅菌15min ，備用。

[用法]

將待檢菌接種培養基，置35 ℃ 培養18-24h 。培養基有混濁物為陽性。

[質量控製]

糞腸球菌ATCC 29212 陽性；化膿性鏈球菌ATCC 10389 陰性

［保存］

4 ℃ 冰箱保存，2 周內用完。

8.氰化鉀試驗培養基

[用途]

主要用於屬間的鑒別，生長有：弗氏枸椽酸杆菌、克雷伯菌腸杆菌菌群、銅綠假單胞菌；不生長：沙門菌-亞利桑那菌群、大腸埃希菌、糞產堿杆菌。

[配法]

蛋白腖10g，氯化鈉5g，磷酸二氫鉀0.225g，磷酸氫二鈉4.5g，蒸餾水1L。

將上述成分加熱溶解在三角燒瓶中，121 ℃ 滅菌15min ，臨用時加入50g / L 氰化鉀溶液1.5ml混勻，分裝於無菌試管中，一份不加氰化鉀作對照。

[用法]

取純培養物接種兩管，1 支氰化鉀實驗管，1 支對照管，置35 ℃ 培養24-72h 。陽性結果為實驗管混濁，對照管混濁；陰性結果（敏感）為實驗管清晰（不生長），對照管混濁性（生長）。

[質量控製]

銅綠假單胞菌ATCC27853生長；福氏誌賀菌不生長。

[保存] 置冰箱內，1 周用完。

注：

（1）氰化鉀抑菌能力與接種菌量及培養基成分有很大關係，所以在試驗時接種菌量不宜過多。

（2）氰化鉀劇毒，使用時注意安全。氰化鉀培養基廢棄前（無論是否用過），應作無害化處理：向每管加400 g / L 氫氧化鉀溶液0.1ml和米粒大的硫酸亞鐵結晶。

9 葡萄糖蛋白腖水培養基

[用途]

（1）    幫助腸杆菌屬與大腸埃希菌屬，葡萄球菌屬與微球菌屬的屬間鑒別；

(2 )幫助肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬結克雷伯菌間的菌種鑒別；

(3）幫助蜂房哈夫尼亞菌與小腸結腸炎耶爾森菌的菌種鑒定。

(4）用於VP 試驗。

[配法]

多價蛋白腖7g ，葡萄糖5g，磷酸氫二鉀5g，蒸餾水1L。

將上述成分混合溶解後，調pH 至7.2 ，分裝小試管，121 ℃ 滅菌15min。

置4 ℃ 冰箱中保存備用。

[用法]

取18-24h 培養物小量接種，35 ℃ 孵育24-48h ，有時可能延長數天。有些細菌，特別是哈夫尼亞菌，在35 ℃ 孵育時VP 試驗結果不穩定，但在25-30 ℃ 下則呈陽性。若環疑為哈夫尼亞菌時，可重複VP 試驗並在25 ℃ 孵育。

觀察方法：

(1)奧梅拉（O-Meara）法

試劑：氫氧化鉀40g 、肌酐0.3g、蒸餾水100ml。

首先將氫氧化鉀溶解。然後加肌酐保存3-4 周。觀察時按培養基試劑10 : 1 比例滴加試劑，混合，置37℃ 4h 或48 ℃ 2h ，充分振搖，變紅色為陽性。

( 2 ）貝立脫（Barritt）法

試劑甲液：60g / L 甲-萘酚乙醇溶液；乙液：400g / L 氫氧化鉀溶液。

觀察時按每2 ml培養物加甲液1ml，乙液0.4ml混合，置35 ℃ 15-30min出現紅色為陽性，若無紅色，應置35 ℃ 4h 後再判定，本法較奧氏法敏感。

[質量控製]

大腸埃希菌ATCC 25922 陰性；陰溝腸杆菌陽性。

[保存]

培養基置4 ℃ 冰箱，2 周內用完。試劑易失效，應用前應進行質量控製。

注：

（1）加入O-Meara試劑後要充分混合，促使乙酰甲基甲醇氧化，使反應易於進行。

（2）試劑必須用已知陽性和陰性的標準菌株進行對照檢查

（3）試劑中加入400g / L 氫氧化鉀是為了吸收二氧化碳。加入量少於0.2 ml，且次序不能顛倒。

（4）貝立脫方法是相當敏感的，它可檢出以前認為VP 試驗陰性的某些細菌。

（5）許多實驗室工作人員有一個錯誤的印象，即VP 試驗陽性菌MR 試驗自然是陰性，或反之亦然。實際上腸杆菌科的大多數細菌產生相反的反應（由於乙酰甲基甲醇形成堿性增加導致MR 陰性和VP 陽性）。某些細菌如蜂房哈夫尼亞菌（哈夫尼腸杆菌37℃ 下孵育和奇異變形杆菌可產生MR 和VP 同時陽性反應，後者常延遲出現。

（6）α-萘酚乙醇溶液易失效，試劑放室溫暗處可保存1 月。氫氧化鉀溶液可長期保存。國內多采用貝立脫法。

10 甲基紅試驗培養基

[用途]

檢查細菌發酵葡萄糖產酸的能力；用於鑒別某些細菌，如大腸埃希菌（陽性）、產氣杆菌（陰性）、陰溝杆菌（陰性），克雷伯菌屬一般為陰性，耶爾森菌屬陽性，其它革蘭陰性非腸道杆菌陰性，單核李斯特菌陽性。

[配法]

(1)葡萄糖蛋白陳水培養基（見前）。

(2)試劑：甲基紅0.1g , 95 ％乙醇300ml，蒸餾水200 ml

［質量控製］

大腸埃希菌ATCC 25922 陽性；產氣腸杆菌陰性

注：

(1)試劑和培養基在應用前要用已知陽性菌（如大腸埃希菌）和已知陰性菌（如克雷伯菌）做對照試驗

(2)MR 試驗的正確性取決於足夠的孵育時間，接種細菌後至少要孵育24h 。通常每毫升培養物滴加1 滴指示劑。

[保存］

置4 ℃ 冰箱，培養基2 周內用完。甲基紅試劑置密閉的棕色瓶內，可使用3 月。

11. 蛋白腖水培養基

[用途］

用於細菌靛基質試驗。

[配法]

蛋白腖（或胰蛋白腖）20g ，氯化鈉5g，蒸餾水1L。

將上述成分溶於水中，校正pH 至7.2 ，分裝試管，每管2-3 ml，置121 ℃ 滅菌15min 備用。

附：試劑配製

（1）    靛基質柯氏試劑：對二甲氨基苯甲醛5g溶於異戊醇75ml中，待冷卻後慢慢加入濃鹽酸25 ml

（2）    歐氏試劑：對二甲氨基苯甲醛1g 溶於95%乙醇95ml中，溶解後慢慢加入濃鹽酸20ml

（3）    色氨酸滴板法試劑：L-色氨酸0.1 隻溶於100ml（pH6.8 ) 0.01mol／L 磷酸鹽緩衝液中。

［用法］

將待檢菌接種培養基，經35 ℃ 培養18-24h ，在培養物液麵，徐徐加入靛基質試劑數滴，陽性者立即出現玫瑰紅色，陰性者呈黃色

[質量控製]

大腸埃希菌ATCC 25922 陽性；肺炎克雷伯菌 陰性

［保存］

置4 ℃ 冰箱，使用期2 周

注：

(1)靛基質試驗方法還有試紙懸掛法，色氨酸滴板法及斑點法，請參閱有關資料

(2）選用的蛋白陳一定要含有豐富的色氨酸，否則不能應用

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