1、應參考國家標準和相關文獻，對所有可能的使用者都介紹生物安全櫃的使用方法和局限性。應當發給工作人員書麵的規章、安全手冊或操作手冊。特別需要明確的是，當出現溢出﹑破損或不良操作時，安全櫃就不再能保護操作者。
2、生物安全櫃運行正常時才能使用。
3、生物安全櫃在使用中不能打開玻璃觀察擋板。
4、安全櫃內應盡量少放置器材或標本，不能影響後部壓力排風係統的氣流循環。
5、安全櫃內不能使用本生燈，否則燃燒產生的熱量會幹擾氣流並可能損壞過濾器。允許使用微型電加熱器，但最好使用一次性無菌接種環。
6、所有工作必須在工作台麵的中後部進行，並能夠通過玻璃觀察擋板看到。
7、盡量減少操作者身後的人員活動。
8、操作者不應反複移出和伸進手臂以免幹擾氣流。
9、不要使實驗記錄本﹑移液管以及其他物品阻擋空氣格柵，因為這將幹擾氣體流動，引起物品的潛在汙染和操作者的暴露。
10、工作完成後以及每天下班前，應使用適當的消毒劑對生物安全櫃的表麵進行擦拭。
11、在安全櫃內的工作開始前和結束後，安全櫃的風機應至少運行5min。
12、在生物安全櫃內操作時，不能進行文字工作。
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