(十五)選擇性抑菌劑
在一些培養基中,常需加入某種特殊抑製劑,以抑製某些細菌的生長,利於檢出菌的生長和鑒別。一般稱為選擇性抑菌劑。
常用的選擇性抑菌劑有膽鹽、薔薇酸、亞硫酸鉍、煌綠、孔雀綠、亞硒酸鈉、四硫磺酸鈉、疊氮化鈉、結晶紫等。膽鹽、薔薇酸、亞硫酸鉍和煌綠都有抑製革蘭氏陽性菌的作用,疊氮化鈉還可抑製變形杆菌的生長。
各種不同革蘭氏陰性菌對同一染料或藥品的敏感度也不相同,利用該特性,可以有目的地抑製不需要的細菌,使病原菌更易被分離出來。
煌綠和孔雀綠能抑製大腸杆菌、痢疾杆菌和傷寒杆菌的生長、而適於分離其它沙門氏菌屬,亞硒酸鈉能抑製大腸杆菌、可用於分禽傷寒杆菌和其它沙門氏菌屬。四硫磺酸鈉可抑製大腸杆菌,而傷寒杆菌和副傷寒杆菌仍可生長。
茲摘要介紹如下:
1.膽鹽
膽鹽是一種膽酸的鈉鹽,是膽酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸的氨基,通過酰胺鍵結合而成。脫氧膽酸鈉是在3 和12 碳上帶有羥基的二羥基化合物,它比三羥酸,即膽酸或牛磺膽酸活性更大,缺少羥基的膽酸沒有活牲。脫氧膽酸鈉在水溶液中呈弱堿性,為無色。
膽鹽可降低培養基與菌膜界麵上的表麵張力、並使胞膜紊亂、加速天然的自溶過程。因脫氧膽酸鈉或牛磺膽酸鈉溶解活力最大、故常用於膽汁溶解試驗中。膽鹽遇酸生成沉澱、使菌落的色素不致外散、更有利於鑒別。
市售膽鹽是中性,脫水膽鹽效果與新鮮膽汁相同、可代替鮮膽汁,避免引起培養基混濁,且可滅菌、濃度易控製。常用培養基中濃度為
商售混合膽鹽中不同膽酸的相對百分數如表2-5所示。
膽酸 |
混合膽鹽 | ||
Bacto-膽鹽 |
Bacto-3號膽鹽 |
Bacto-牛膽汁 | |
石膽酸 |
2.2 |
—— |
—— |
脫氧膽酸 |
1.1 |
41.7 |
44.7 |
鵝膽酸 |
48.9 |
2.9 |
4.5 |
膽酸 |
0.4 |
53.0 |
48.8 |
豬脫氧膽酸 |
25.8 |
2.0 |
—— |
α-murjcholjc |
21.6 |
0.6 |
—— |
Downie氏等把膽酸分成兩類:( 1 )非結合酸,其不同類型隻是它們的化學結構不同,( 2 )絡膽酸,它是脫氧膽酸的加成化合物,根據增加物的類型不同而有差異。
牛磺酸是由氨基酸、半胱氨酸衍生而來,它與膽酸形成的結合物稱為牛磺膽酸。膽酸與甘氨酸結合稱為甘膽酸。脫氧膽酸是二羥酸,膽酸和牛磺膽酸是三羥酸,所有的膽汁酸都有一個共同的基本核,即環戊烷多烴菲。牛磺膽酸、甘膽酸、脫氧膽酸等對革蘭氏陽性菌有強大的抑製作用,對革蘭氏陰性菌僅有輕度的抑製作用。脂肪酸也有抑菌作用。
膽汁的固形成分約占總量的13%,其中膽酸約為5-6%,粘蛋白4%,類脂2%,膽固醇0.04%,無機物0.8%,膽汁色素0.2%。
膽汁具有降低表麵張力的作用,使細菌的細胞膜損壞,原生質中一部分內容漏出,或促使菌體的崩解,但腸係細菌因在腸道內長期與膽汁接觸.由於適應作用,所以對它有一定的抗力。牛膽汁透析物中、含有3.25μg /ml的色氨酸、可能有增菌作用。膽汁中的粘蛋白可作為細菌營養物、並對膽酸和脂肪酸的抑菌力起一定的中和作用。常用量為10
2 .滌波
為商品名稱、係石油副產品。其主要成分為十二烷基硫酸鈉。具有抑製革蘭氏陽性細菌發育的作用,與膽酸鹽作用相似。由於其對革蘭氏陰性細菌的作用比膽酸鹽弱,且價格較便宜、因而近年來多用於培養基中。應注意,其不同批號產品所含成分常有差異,故在使用前應先進行予試。
3 .苯乙醇
對革蘭氏陰性細菌有抑製作用。常在瓊脂培養基中加入0.25%量,以製備革蘭氏陽性球菌類的選擇性培養基。
4.疊氮化鈉
能抑製革蘭氏陰性細菌的生長發育,特別對變形杆菌抑製效能顯著,對革蘭氏陽性細菌則無作用。常用於奈氏糞鏈球菌的選擇性分離培養,用量一般為0.05%;用於葡萄球菌則為0.02%。
5.碲酸鹽或亞碲酸鹽
亦為革蘭氏陽性細菌分離培養的一種選擇性抑菌劑,常常用於葡萄球菌(凝固酶陽性)和白喉杆菌分離培養基。在革蘭氏陰性細菌中,由於弧菌對其抵抗力較強,故也用於霍亂弧菌,副溶血性弧菌的分離培養基。
8 .水化氯醛
能抑製變形杆菌的蔓延生長而不影響其他革蘭氏陰性杆菌的生長,並且在含血培養基中不發生溶血作用,所以不影響細菌溶血性能的鑒定。
7.煌綠和孔雀綠
能抑製益蘭氏陽性菌、大腸杆菌、痢疾杆菌和傷寒杆菌的生長,故常用於分離其它沙門氏菌的培養基。應注意,商售品各批的色素含量常有差異,故在使用前必須要用標準菌株進行測試實際使用量,不可拘守配方規定。
8.亞硒酸鹽
能抑製大腸杆菌、可用於分離傷寒杆菌和其它沙門氏菌培養基。
9.四硫磺酸鹽
由硫代硫酸鈉和碘經氧化生成的四硫碳酸鈉,有抑製大腸杆菌作用、而對包括傷寒杆菌在內的沙門氏菌均無抑製作用。因沙門氏菌具有四硫磺酸酶能分解四硫磺酸鈉,而大腸杆菌等沒有這種酶所以生長被抑製。
四硫磺酸鹽對熱頗為敏感、極易分解為硫酸,亞琉酸和硫。故培養基加碘後不能加熱。
10.各種抗生素和抗菌藥物
近年來國外一些新的選擇性培養基,多采用抗生素為選擇性抑菌劑以提高培養基的選擇效能,常見的有青黴素G、鏈黴素、多粘菌素B、頭孢黴素、放線菌酮、萬古黴素、兩性黴素、卡那黴素、杆菌肽、新黴素,新生黴素,短杆菌素,粘杆菌素 ,製黴菌素 ,甲氧苄氨嘧啶、磺胺嘧啶等。
11.吐溫
為耐熱的水溶性長鏈脂肪酸的酯類,係山梨醇的聚氧乙烯衍生物,即:
吐溫20 聚氧乙烯月桂酸山梨醇脂
吐溫40 聚氧乙烯棕櫚酸山梨醇脂
吐溫60 聚氧乙烯硬脂酸山梨醇脂
吐溫80 聚氧乙烯油酸山梨醇脂
為一種表麵活性劑,加於培養基中可降低細菌體周圍與培養基接觸麵之間的表麵張力。使外圍營養物質更快地進入菌細胞內,因而促進細菌較快的生長和其它的活動。並可用為分枝杆菌屬各菌種鑒定的試劑,即吐溫水解試驗。
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