肉湯保存法用於淋球菌保種的研究及效果觀察

摘要：目的尋找一種更為簡單、方便且有效的保存淋球菌的方法。方法對分離的3 4株經菌落形態、氧化酶試驗及生化反應鑒定為淋球菌的菌株用 肉湯在不同的溫度下進行保種 ； 並用本實驗室自製的培養基對保存菌株進行定期複蘇。結果   采用肉湯保存法，淋球菌在-2 0 ℃至少可保存2個月，-30℃至少可保存 2～3個月， -70℃至少可保存 1年以上；並發現液氮中淋球菌的保存效果最好及保存時間最長 。結論  肉湯保種法可以用於淋球菌的保 存 。 

1 材料與方法

1.1試驗主要試劑

氧化酶試劑(鹽酸四甲基對苯二胺) ，購自廣西皮膚病研究所；糖發酵試劑及淋球菌培養基由實驗室自己配製 。 

1.2菌株來源

34株淋球菌標本分離自南昌市各醫院門診就診患者 。 

1.3肉湯的配製

取250g牛肉(去除脂肪與筋膜) 剁碎，加蒸餾水500 ml 並放人少量的NaOH，然後煮1h ( 若已經在4℃冰箱過夜則煮30 mi n即可) 。過濾除渣，調整容量至500ml，再加入5 g蛋白腖，2.5 g Na C1，調整p H值至 7.4 ～7.6 ，高壓滅菌後冷卻置 4℃冰箱保存備用。 

1.4菌株的分離與純化

將尿道或官頸分泌物接種於淋球菌培養基上，36.5℃ 、 5% ～ 10%CO₂ 孵育2 4 h 。挑取染色鏡檢為革蘭陰性球菌、氧化酶試驗陽性、糖發酵試驗隻能夠分解葡萄糖的菌落進行純培養。 

1.5 菌種的保存

將純培養2 4 h後的淋球菌菌落用接種環刮下，洗入已經預溫的肉湯管中(菌濃度約為1×10⁸) ，每個標本分別收集4管後分別置-20℃、-30℃、-70℃冰箱以及液氮中保存。 

1.6 菌種的定期複蘇

將保存於上述溫度中的菌株進行定期複蘇。複蘇時間為保存第7天、 第1 5天、第30天、第 2個月、第 3個月 、第 6個月以及第1 2個月， 複蘇結果以長出肉眼可見的淋球菌菌落為標準。 

2   結 果

複蘇結果見附表 。 

附表 134株淋球菌不同保存溫度下保存不同時間後的存活率

 

3   討 論

目前淋球菌最理想的保種方法為冷凍真空幹燥法，但該方法需真空泵設備且操作相對複雜。本方法與巧克力液體培養基保種法和脫脂牛奶保種法相似 ，並發現肉湯保存法在相同的條件下對淋球菌的保存效果與文獻報道的脫脂牛奶保存法無明顯差異。對於細菌實驗室 而言，本保種方法所使用的材料來源更加方便，並且肉湯的透明度高，有利於對細菌的濃度進行觀察 ，但本方法保種過程中需要注意調節肉湯的pH值 ，否則容易影響細菌的活力 。