目前, 我室對培養基的滅菌均采用高壓蒸氣滅菌法,此方法最為有效,但滅菌時間較長,不適合一些實驗室應急品的快速消毒滅菌,同時若操作不當也易造成滅菌不徹底。近年來, 微波滅菌由於其具有滅菌效率高,速度快,處理後無汙染等優點而日益受到重視。為了嚐試用微波滅菌來替代傳統的高壓滅菌,我們選用家用微波爐用於我室常用培養基的滅菌, 效果較為滿意,現將實驗過程總結如下。
1 方法
1.1實驗材料 ①菌種 : 大腸杆菌 ATCC 25922, 金黃色葡萄球菌ATCC 25923 ( 由太和醫院檢驗科細菌室提供) ,枯草芽孢杆菌( 由我院病原學實驗室提供,進行了菌種鑒定) 。②培養基製備: 按處方配製液體培養基 ,營養瓊脂( 北京奧博星生物技術有限責任公司) 培養基各5瓶, 每瓶2 0 0 m l , 盛於 3 0 0ml 錐形瓶中, 然後逐瓶放入微波爐托盤中央 ,照射至預定時間取出適量 。
1.2 培養 液基傾注試管,固基傾注平板,37℃培養 1—7天逐日觀察結果。
1.3 接種 將微波滅菌後的培養基分別接種大腸杆菌ATCC 25922 ,金黃色葡萄球菌 ATCC 25923和枯草芽孢杆菌 , 培養 l 8—2 4 h觀察其菌落特征。
1.4 實驗儀器 微波爐( WD 9 0 0 B型格蘭仕微波爐, 9 0 0 W,2450 MH Z, 順德市格蘭仕微波爐電器有限公司) ; 電熱恒溫培養箱( H H W2 1 —6 0 0型,湖北黃石醫療器械廠) 。
2 結 果
2.1 對經微波滅菌的培養基經 3 7℃恒溫培養箱培養數 日後觀察, 見表 1 。
表1 微波滅菌的兩種培養基經37℃恒溫培養1-7天觀察
培養基種類 |
微波時間(min) |
37℃恒溫培養箱培養時間 |
1天 |
2天 |
3天 |
4天 |
5天 |
6天 |
7天 |
營養瓊脂培養基 |
1 |
1個菌落生長 |
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菌落增多 |
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2 |
無 |
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1個菌落生長 |
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3 |
無 |
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1個菌落生長 |
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4 |
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無 |
無 |
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無 |
5 |
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無 |
無 |
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無 |
液體培養基 |
1 |
有菌生長 |
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2 |
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無 |
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無 |
3 |
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無 |
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無 |
4 |
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無 |
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無 |
5 |
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無 |
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無 |
2.2 質量檢測 分別接種不同菌株在兩種培養基上的形態觀察,見表2 。
表 2 接種在兩種培養基上的不同菌株的形態觀察
菌株 |
營養瓊脂培養基 |
液體培養基 |
大腸杆菌ATCC 25922 |
菌落圓形,直徑2-3mm,邊緣整齊,灰白色 |
均勻渾濁生長 |
葡萄球菌ATCC 29523 |
菌落圓形,直徑2mm,邊緣整齊,金黃色 |
均勻渾濁生長 |
枯草芽孢杆菌 |
扁平,灰色,不透明,幹燥,皺紋,邊緣不整齊的大菌落 |
在液體表麵形成灰白色膜狀生長 |
3 討論
①營養瓊脂培養基在微波作用下 5 m i n可達到滅菌效果 。 ②液體培養基在微波作用下2 mi n即可達到滅菌效果。③在一定條件下 , 幹燥狀態對殺菌速度影響大;同等條件下 , 含水量多易滅菌。
④實驗結果表明: 用微波爐消毒滅菌可以縮短滅菌時間, 而不影響培養基的營養成分, 此種方法安全可靠,滅菌好。
⑤有報道 :微波可以殺滅各種微生物,不僅可以殺滅細菌繁殖體,也可以殺滅真菌、病毒和細菌芽孢。由於一般病原微生物的細胞液吸收微波的能力強於周圍其它物質,因此微波能在 1 — 2 m i n內有效殺死致病細菌。在微波爐中溫度達7 0℃以上就能殺死一般細菌。
4 微波滅菌原理
微波爐產生的微波頻率為 2450 MHZ,是消毒常用的微波之一。具有升溫快,殺菌力強, 消毒時間短的特點,但其穿透能力較弱,適宜於小件或厚度不大的物品的消毒滅菌 。有試驗證明其殺菌機理除有熱效應外,還具有某些非熱效應,是熱效應和非熱效應綜合作用的結果 。有人認為,非熱效應是因電磁場改變了細胞膜附近的離子分布和細胞膜的通透性, 從而改變細胞的代謝之故。有人認為,當微波照射時,高分散相的蛋白質特別是酶分子以及氨基酸、肽等可選擇性的吸收微波能量,從而改變其分子結構或個別部分的結構,致使生化反應發生改變等。關於微波的生物學作用機製至今尚無明確的一致解釋, 有待進一步探討。
大量的研究報道顯示 : 微波是實現安全,可靠,高效滅菌的一種方法; 但微波對不同菌種的滅菌, 還需通過實驗具體的滅菌條件。應用微波爐時,要盡量創造有利條件, 以達到家庭, 實驗室快速滅菌的要求。
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