《水生微生物實驗法》——取樣（2）

二、取樣地點的選擇

（一）采淡水（河水、湖泊水稱）樣品的地點選擇

河流中微生物種類與數量因流速及水深等因素的不同而有明顯變化。為了獲得有代表性的水樣應選擇在經常流動的河道中央，水深為20-30厘米的水層取樣。若調查垂直分布，則應選擇在河流最深處為采集點。

湖泊在夏季通常會形成顯著的溫躍層，所以一年內最好有季節性的取樣。采樣地點設在湖泊中心與沿岸的具有代表性的水域。

在判斷汙水對河流與湖泊的影響時，一般應在汙水入口處按一定距離及有代表性的出口地點分別設站取樣。同時還要在沒有汙染的上遊水域采樣作對照。

（二）海洋、港海取樣地點的選擇

同海洋微生物種群的特點有關的環境因素主要是：溫度，鹽度，靜水壓力以及有機物質等。但是這些因素在港灣及沿岸帶又往往受潮汐、河水的流入、周圍環境汙染的影響而有很大的變化。所以取樣一方麵要根據具體環境設點：另一方麵又要考慮不同的調查目的（如基礎調查、監測調查、專題調查和應急調查等）而設站取樣。

設站的一般原則為：

（1）近岸較密，遠岸較疏。

（2）重點水域，如河口、排汙口、漁場、養殖場、海濱浴場、旅遊區、國防設施區和海上石油開發區等，應設較密的取樣點。對照水域的采樣可以疏些。

（3）取樣地點力求縱、橫成斷麵，如海上斷麵與岸線垂直、河口區的斷麵和徑流擴散方向一致或垂直、開闊海區縱、橫斷麵成網格狀，港灣地區視地形、潮流、航道的具體情況布設取樣斷麵。

( 4 ）海洋微生物的取樣站位應盡可能與原有海洋調查標準斷麵站位吻合。

( 5 ）力求與固定監測站的岸邊點銜接．

（三）沉積物取樣地點的選擇

水底沉積物中微生物的數量較大而穩定，可以按照不同的調查研究目的及地質、地形的特征設點取樣。

沉積物取樣地點通常應著重考慮：

( 1 ）按底質結構類型設點，如泥質、沙質、岩石、混合底質等分別設點。

( 2 ）按地形結構設點，如平麵和斜麵，海溝與海灘、航道及岸邊以及受潮汐影響的不同深處都應該取代表性的地形沉積物。

( 3 ）按不同層位設點，如氧化層、還原層、衝刷層、沉積層、有機物層、礦質層等均可以按不同深度分別取樣。

三、水樣采集

采集供微生物學檢驗的水樣必須按無菌操作技術進行。並保證在送檢過程中不受外界汙染，這樣才能反映當時當地的微生物真實情況。

（一）采水器

采集深水樣品較複雜，要有專門的取樣設備和熟練的取樣技術。

采水器種類很多，文獻記載的已有一百多種。目前常用的有：擊開式采水器，即J-Z 式采水器：複背式采水器：尼斯金（Niskin ）采水器；顛倒采水器，即南森（Nansen ) 式采水器；深水細菌取樣器；無菌取樣瓶等。我國常用的有下列三種。

1 ．擊開式采水器（J-Z 式采水器）

擊開式采水器是參考佐貝爾（ZoBell ）采水器改製而成的。主件是玻璃水樣瓶，不能耐受水深500 米以深的靜水壓力，僅適用於500 米以淺的海區。由於采水瓶事先已滅菌，因此所采的水樣汙染率較低，是一種比較理想的淺水微生物采水器。

 擊開式采水器包括機架和水樣瓶兩部分。機架部分呈" V ”形，其兩翼成72 度角張開為機架的正麵，整個機架是用一塊厚6 毫米，寬210 毫米，高290 毫米的黃銅板製成。在機架正麵距架腳120毫米處，裝有一條半環形的銅帶。帶的一端絞在機架左翼，另一端由元寶螺母固定在機架右翼上。機架下部兩翼間裝一半圓形托板撐住采水瓶，並可調高低。入水玻璃管被機架左上角的彈簧夾和右上角敲擊杠杆固定住。敲擊杠杆下有個直角形的彈簧連接杆，位於機架的中線處。連杆下部呈鉤狀。

水樣瓶可用500毫升注射用的生理鹽水瓶，橡皮瓶塞中央插一支直角形的內徑6-7 毫米的玻璃管，管橫端連接長約260毫米的厚壁像皮管，橡皮管的另一端連接入水玻璃管。整個采水器是用兩個固定夾固定在綱絲繩上。使用方法如下：

( l ）將水樣瓶洗淨編號，把橡皮塞和進水管安裝好，然後用紙包好（如果是準備在深水取樣，必須在瓶內放一支支撐橡皮塞的玻璃棒，防止深水中高壓將橡皮塞壓入瓶內），經高壓蒸氣（121℃ ）滅菌20 分鍾後，待尚未冷卻時迅速用火焰將入水玻璃管的未端封固，使瓶內處於半真空狀態

( 2 ）將采水瓶置於機架的托板上，用半環形銅帶箍住瓶的中部。把曲形橡皮管放在機架右上角的下缺口內，再將入水玻璃管橫放於機架兩翼上角的兩缺口內，用左上角的彈簧丈夾住水管的封閉端。

( 3 ）兩固定夾將整個采水器固定在絞車的鋼絲繩上。

( 4 ）放開絞車鍋絲繩，將采水器放到預定水層，然後投下使錘，令其擊中敲擊杠杆的後端，使前端迅速曉起將玻璃入水管擊斷，於是橡皮伸直。由於瓶內處於半真空狀態，水樣迅速被吸入瓶內。與此同時，彈簧杠杆因橫肢受杠杆後端部壓力而下降，使此杆下端掛鉤上的使錘脫開，並沿鋼絲繩下滑擊在第二采水器的杠杆上，通過以上的連續動作，可使固定在同一條鋼絲繩上的多個采水器相繼采到各個頂定深度（一般取0 、10 、20 、 35 、50 、75 、100 、150 、200 米等．最後至海底以上的5 米處—— 底層水）的水樣。

2 ．複背式采水器

複背式采水器是由一個厚壁橡皮球（球口的直徑為8 毫米，容量為500 毫升）附加在顛倒采水器上構成的。可在較深的水層使用。

使用前將橡皮球洗淨，編號，用棉花把球口塞好，用紙將橡皮球與塞一鏈一釣分別包起來，在高壓蒸氣（121 ℃ ）下，滅菌20 分鍾。使用時，將一個金屬裝配環安裝在采水器的下部，然後再把橡皮球內部的空氣排出，用塞子將球口塞緊使其呈扁縮狀態，橡皮球被卡在裝配環上。球塞連接一條銅鏈。銅鏈的另一端用一卡式掛鉤釣在顛倒采水器的釋放裝置和彈簧片之間的鋼絲繩上。銅鏈的長度必須合適．既足以使顛倒采水器顛倒下落．又能夠在其顛倒之際把球口上的塞子拉開。

複背式采水器具有兩個優點：

( 1 ）可以應用於較深水層采樣．

( 2 ）在用顛倒采水器的同時也可以用橡皮球采到水樣，從而節省了人力和時間．

3 ．表層水樣采集瓶在采集表層水樣時，船上一律禁止排汙。可用無菌水樣采集瓶，浸入船頭水下20-30厘米處取水。

如果調查船的船弦較高時，可以用表層水樣采集瓶。表層水樣采集瓶是用一根杆子，上麵用夾子固定一個已滅菌的玻璃磨口瓶，或者用繩索吊起的裝在鐵框內的無菌采水瓶，下麵掛一金屬錘，將采水瓶降至水中預定深度時，用繩子拉開瓶塞裝滿水樣，提出水麵，蓋好瓶塞，裝入冰筒，立即送往實驗室處理。

（二）自來水樣的采集

自來水樣的采集較簡便，但要求取樣後立刻檢查。取水樣過程為：

( 1 ）先用火焰（酒精燈或煤氣燈）灼燒自來水龍滅菌 。

( 2 ）將水龍頭完全旋開，放水數分鍾，排除管道內的積存水。

( 3 ）用普通無菌玻璃瓶直接放在水龍頭下取樣，但不能裝滿，應留空間以便搖勻吸樣。如果水中含有餘氯，必須按照每500 毫升水樣加入3%硫代硫酸鈉（Na₂S₂O₃·5H₂O  )溶液1 毫升中和水祥中的餘氯，以防水中餘氯的殺菌作用。

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