無菌操作
(一)船上微生物實驗室、無菌室及其器具
海洋、港灣和江河中的微生物調查研究,需要專用的調查船,要求船上有專用的實驗室。由於水樣的處理、現場記錄的整理等等需要在室內進行,因而要有適當大小的實驗室。室內要有交流電源、供水係統和必要設備。如冰箱、恒溫培養箱、真空抽氣泵、電爐、小型的無菌箱和高壓蒸汽鍋.以及器具〔見下節的(一)〕 .
無菌室是供上岸時實驗用的。室內要求整潔,有過濾空氣裝置,應無灰塵和基本無菌,室內應有二道門,門上應掛布簾,預防人進入時空氣直接通入室內。如果室內無過濾空氣的裝置,室內應安裝紫外燈殺滅空氣中的微生物(或用化學藥物),室內同樣要有交流電源和必要的器具和設備,
(二)基本操作技術
微生物的每一個實驗研究工作都必須應用無菌操作技術。主要是采用焚燒滅菌——幹熱滅菌原理,及應用已滅菌的器具、藥物、培養基,使在微生物的接種、分離、衝稀等工作中不致染雜菌,有助於實驗目的的實現.
1 .斜麵接種法
(1)取無菌斜麵培養基試管貼上標簽,編號,注明接種菌的菌名,接種日期,接種人的姓名等。
(2)點燃酒精燈或煤氣燈,以下的操作.尤其是試管的菌種都要始終在火焰邊進行.
(3)將菌種和斜麵培養基的兩支試管放在左手拇指和其他四指上.使中指在兩試管之間.斜麵向上,管口向外,成水平狀態,也可將兩試管放在左手掌中央,用手指托住試管
(4)用右手將棉花塞擰鬆,以利接種時拔出。
(5)用右手拿接種環柄,使接種環垂直在火焰上.將環的部分燒紅滅菌,環以上部分,在接種時進入試管的一段也應在火焰上燒過滅菌.
(6)用右手的小指、無名指和手掌拔取棉塞,切勿將棉塞放在桌上,應始終夾在手中。
(7)灼燒試管口,並靠手腕動作不斷地轉動試管口,借以燒死粘染的微生物。
(8)將燒過的接種環伸入菌種管內,接觸一下沒長菌的培養基部分,使其冷卻,以免燙死接種菌體。而後輕輕地挑取菌苔少許,慢慢地將接種環抽出試管,注意不要使環的部分碰管壁。取出後不可使環通過火悄了以免把苗燒死或引起變種.
(9)隨即將接種環伸進手中的另一試管,在培養基上輕輕地劃直線或波線接種。劃線時要從底部到頂部,即由下而上,不要把培養基劃破,也不要使菌種沾汙管壁。
(10)再灼燒管口後,塞上棉塞.塞棉塞時不要甩試管去迎棉塞,以免移動試管時納入不清潔的空氣而染菌。
(11)將接種環再灼燒,殺死環上的殘菌,以免汙染。尤其是對病原菌,此項操作更為重要,反之就有致病的危險。最後用右手塞緊棉塞。
2 .液體培養基的接種用滴管或移液管接種時,應事先滅菌好,不能將滴管或移液管在火焰上灼燒,隻能使滴管或移液管在火焰上通過1-2 次,接觸菌液部分,在通過火焰時應緩慢些,使沾染管表麵上的微生物殺死.但不能太慢,以免受熱膨脹而改變容量。接種量為0.1毫升.其他步驟參照斜麵無菌接種法。
3 .穿刻接種
接種前後對接種針及試管口的處理同斜麵接種法,接種時將挑有接種物的接種針,從半固體培養基中央直刺至離管底一厘米左右.成一直線後立即從原刺線退出。刺入或退出時,均不可使接種針左右搖動 .
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