《水生微生物實驗法》——綠菌屬的富集培養及分離

錄入時間:2010-9-10 15:33:07 來源：青島betway必威西汉姆联

（十四）綠菌屬的富集培養及分離

綠菌屬含有葉綠素，是光合性的嚴格厭氧的有機體。特征是單細胞卵球形，不運動，革蘭氏陰性。由於具有葉綠素，細胞團塊呈綠色；吸收峰為750 納米。能氧化硫化氫於細胞外沉澱，此類細菌分布於海泥、淡水泥及海水中．泥生綠菌能將硫氧化為硫酸鹽、嗜硫代硫酸鹽綠菌能氧化硫代硫酸鹽，連四硫酸鹽及分子氮．

1 ．富集培養

( 1 ）富集培養液成分及其製備：

NH₄Cl 1 克

KH₂PO₄ 1 克

MgCl₂ 0.5克

NaHCO₃ 2 克

Na₂S ·9H₂O 1 克

NaCl 海生種30 克

淡水種10 克

FeCl₃·6H₂O 0.0005克

水1000 毫升

將上述各鹽溶解於水中，用磷酸調pH 為7.3 。因此種培養液有很高的選擇性．無需滅菌，但非常不穩定．需在使用前配製。

（2）接種培養：

① 在大量曝光和分解有機物產生硫化氫的地方采淤泥．

② 將淤泥放在50毫升的廣口磨口玻璃塞瓶中，放入數量0.5-1 厘米高．

③ 裝滿液體富集培養基，上塞排除空氣．

④ 置於20-30 ℃ 下培養，並在離瓶4 時處放幾盞25 瓦鎢絲燈。

⑤培養3-10天後觀察，至較多綠色細菌出現為止，隨後紅色或紫色菌也跟著發生，故不宜拖延分離時間。若有紅色或紫色菌很快出現．並且生長旺盛，應試驗不同來源的材料。

2 ．分離純化培養

（1）培養基成分及製備，綠菌屬瓊脂培養基成分如下：

NH₄Cl 1 克

KH₂PO₄ 1 克

MgCl₂ 0.5克

NaCl 海生種30 克

淡水種10克

瓊脂 10-15克

水 700毫升

將上述各成分混合於高壓下蒸煮溶解。如不立即使用，應在121 ℃ 蒸氣下滅菌15 分鍾。

立即使用前，先製備下列溶液．

① NaHCO₃ 2 克加水100 毫升。

② Na₂S·9H₂O 1克加水100毫升。

③ FeCl₃·6H₂O 5 毫克加水100 毫升。

④ 1N 的H₃PO₄

將以上各液於121 ℃ 蒸汽下滅菌15分鍾。同時將綠菌屬瓊脂培養基融化，於水溶中冷至45 ℃ 。溫熱溶液① 、② ．③ 至45 ℃ ，無菌地倒入上述培養基充分混合。用無菌的磷酸調pH7.3 。分裝於150×16 毫米鈉玻璃試管中，放在45 ℃ 水溶中．

采用搖管法〔見下節的著色菌屬的分離〕培養。