《水生微生物實驗法》——水中沙門氏菌的分離

（十九）水中沙門氏菌的分離

通常對水質的細菌學質量檢測，隻要檢驗其中大腸杆菌群數就可對其水質作出評價，病原菌如沙門氏菌等在水中的相對數量較少，從水中直接檢出的機會較少，檢驗技術的難度也較大，故一般不作為水質細菌學檢驗的常規檢驗項目，但作為對醫療機構所排出的汙水進行細菌學的監測則具有一定的衛生意義。

由於水中病原菌的數量較少，要分離檢驗它必須先濃集和增殖培養，然後才利用選擇性培養基分離。本實驗用四磺酸鹽增菌培養液，既特別適合於增殖沙門氏菌，又能抑製大腸杆菌群和其他非病原菌的生長、用亞硫酸秘瓊脂基，能使沙門氏菌、包括傷寒沙門氏菌在內生長良好．沙門氏菌能利用葡萄糖，將亞硫酸鉍還原成硫化鉍．形成黑色或黑綠色菌落．其色素滲入培養基內，並擴散到菌落周圍，對著光觀察有金屬光澤．因此種培養基抑製性較強，如培養24 小時未見長出或菌落太小應繼續培養24 小時，然後才再行挑選．

1 ．培養基成分及其配製方法

（1）四磺酸鹽增菌培養液（也稱為T .T ．增菌液）

① 基礎培養基

膘蛋白腖0.5 克

膽鹽0.1克

CaCO₃ 1克

Na₂S₂O₃·5H₂O  3 克

蒸餾水100 毫升

將各成分溶於蒸餾水，並加熱至沸，搖動使碳酸鈣混均後分裝於試管內．每管裝10 毫升。121℃ 蒸汽下滅菌15分鍾。

② 碘溶液

碘3 克

K1  2.5 克

蒸餾水10 毫升

將碘化鉀2.5克溶於蒸餾水10 毫升，邊加碘邊研磨，使碘化鉀全部溶解後，加碘存於棕色玻塞試劑瓶內備用。臨用前吸取碘液0.2 毫升，加於盛有10 毫升基礎培養基的試管內。

如每100 毫升的基礎培養基加0.1%煌綠水溶液1 毫升，可加強對非病源菌的抑製作用，如再加L –胱氨酸0.3 克，則更有利用沙門氏菌的生長。

（2）亞硫酸鉍瓊脂基：

① 基礎培養基：

蛋白腖10克

牛肉浸膏5 克

瓊脂20-30克

蒸餾水1000毫升

將這些成分混合後，調pH 至7.2 ，於高壓蒸汽鍋內，121℃ 下滅菌20 分鍾、備用。

② 亞硫酸鉍混合液：

枸櫞酸鉍銨6 克

無水Na₂SO₃  20 克

葡萄糖10 克

無水Na₂HPO₄   10 克

蒸餾水200 毫升

溶解枸櫞酸鉍銨6 克於50 毫升沸蒸餾水，溶亞硫酸鈉20 克於100 毫升沸蒸餾水，溶葡萄糖10 克於50毫升沸蒸餾水。

將枸櫞酸鉍銨溶液與亞硫酸鈉溶液棍合，煮沸3 分鍾，趁沸時再將磷酸氫二鈉溶入。冷卻後加葡萄糖液．盛於無菌玻塞瓶內，存冷暗處備用。

③ 枸櫞酸鐵與煌綠混合液：將枸櫞酸鐵l 克溶於100毫升蒸餾水，加1%煌綠水溶液12.5 毫升，盛於滅菌的玻塞瓶內，存於冷暗處備用。

④ 取已滅菌的瓊脂培養基1000毫升加熱融化，以無菌操作加亞硫酸鉍混合液200 毫升及枸櫞酸鐵與煌綠混合液45 毫升，混勻後製成平板培養基備用。

2 ．沙門氏菌的濃集

將紗布緊卷成卷後剪成3 個短段，用細繩在中部縛緊滅菌。把此紗布卷分別懸掛於被檢水體的水麵下6 寸，6 尺及12 尺處．3-5 天後水體內的懸浮物和細菌將吸附在紗布卷內，此時將紗布卷取出，置於無菌容器內，立即送增菌培養，不可延誤。增菌培養時分別將紗布卷內的吸水擠出，接種增菌培養液，或直接將紗布卷的全部或一部分放於培養液內，在37℃ 下培養2-5 天。

3 ．分離培養

取經2 天培養的三種增菌液分別吸出1 毫升接種於編好代號和注明日期的平板培養基上，每種樣品接種2 份。第三、四、五天每種樣品照樣接種2 份。接種後，均置子37℃ 下培養48小時後觀察菌落，做好記錄．典型的菌落呈黑色或帶有金屬光澤。但是，有時某些沙門氏菌菌落也可能呈綠色。如無典型的黑色菌落，綠色的也應挑取鑒定．即使是黑色的菌落，也可能不是沙門氏菌，而是產生硫化氫的變形杆菌及某些大腸杆菌。最後比較各樣品的檢驗結果。

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