《水生微生物實驗法》——水中糞鏈球菌群的增菌培養與分離

糞鏈球菌是腸道鏈球菌類的一個菌群、與食物中毒有關，屬人類致病菌。常存於人與動物所排出的糞便及生活用水中，如海水遊泳場、淡水遊泳池和一般糞便汙染的水源及飲用水都有可能檢查到糞鏈球菌，鏈球菌的菌落較小（直徑約0.5毫米）、圓形、突起、灰白色、半透明或不透明、表麵光滑、有乳光。不同菌株的菌落周圍有不同變化．

1 ．增菌培養

增菌培養基成分及製備．匹克增菌液：

1 ％胰蛋白腖的心肌浸液200毫升

1 : 25000結晶紫鹽水溶液10 毫升

1 ：800三氮化鈉溶液10 毫升

脫纖維兔血（或羊血）10 毫升

將上列已滅菌的各成分，無菌地依次混和均勻，分裝於試管、每管2 毫升，保存冰箱備用。

2 ．接種培養

（1）如果汙染較嚴重的水樣，可直接把樣品接種於匹克增菌液中，若汙染較輕度需要采用濾膜法先將細菌濃集，而後放於增菌液中。

（2）將已接種的匹克增菌液置44.5℃的水浴中培養至出現明顯的渾濁。

（3）挑取渾濁液．塗片，染色，鏡檢和觀察其形態。若其形態和上麵所述的一致，可初步視為糞鏈球菌。

3 ．分離純化培養

（1）培養基成分及其製備：

① 酪氨酸山梨醇醋酸亞鉈瓊脂基礎培養基：

蛋白腖10 克

酵母膏l 克

山梨醇2 克

酪氨酸5 克

瓊脂12 克

蒸餾水1000 毫升

將各成分溶化後分裝於250毫升三角瓶中．每瓶100 毫升，112℃蒸氣下滅菌10分鍾。即為基礎培養基。

完全培養基：調基礎培養基的pH 為6.2 後，無菌地按基礎培養基的比例加入以下成分即成。

三苯四唑化氮0.01%

醋酸亞鉈%

山梨醇0.4%

將滅菌後的基礎培養基立即注入培養皿為底層，然後每皿內加一層完全培養基，則得雙層平板培養基。用於分離鏈球菌。

② 醋酸亞鉈瓊脂：

醋酸亞鉈l 克

蛋白腖10 克

酵母膏10 克

葡萄糖10 克

瓊脂13 克

蒸餾水1000毫升

將各成分溶於水、調pH 為6.0，煮沸1分鍾分裝入三角瓶．每瓶100 毫升，15 磅滅菌15 分鍾，冷至50℃ ，每100 毫升中加1%三苯基四唑化氮（TTC ）溶液1 毫升，混合均勻，製成平板。

此培養基用於鑒別鏈球菌。接種物在這種瓊脂平板上，於35-37 ℃ 培養12 小時後，可觀察到：糞鏈球菌菌落中央紅色，有或無窄的白色邊緣；乳鏈球菌菌落深紅色．堅忍鏈球菌、牛鏈球菌等菌落為粉紅色或微紅色．

（2）分離接種：

① 將增菌培養物在分離瓊脂平板培養基上劃線或塗布接種，或將經水樣過濾的集菌濾膜直接貼於分離瓊脂平板培養基上（濾紙與平板上不得含氣泡）

② 於44.5℃的厭氧條件下培養至長出明顯的菌落。如不純可重複以上步驟在平板培養基上劃線純化．最後接種於斜麵培養基上密封保存，以便做生理生化和血清鑒定用。

另法是．從分離瓊脂平板上挑選暗色的鏈球菌菌落於鑒別瓊脂平板上塗布或劃線接種，於35-37℃ 下培養，12 小時後，長出明顯菌落，選其菌落中央紅色、邊緣白色的菌落，接種純化．

上一篇：《水生微生物實驗法》——水中葡萄球菌的分離與觀察

下一篇：《水生微生物實驗法》——水中霍亂弧菌的分離檢驗