《水生微生物實驗法》——從泥樣中分離放線菌

水中放線菌無論在數量上或在種類上都比其他的細菌少得多。但在水、沉積物及浮遊生物中都能分離到放線菌，如Kpucc 從海泥及浮遊生物中分離到灰色放線菌、球孢放線菌及直線白色放線菌等三種。在淡水中也有多種放線菌，如遊動放線菌屬等。

1 ．培養基成分及其製法

① 葡萄糖酵母膏牛肉膏蛋白腖瓊脂   即埃默森氏培養基．葡萄糖、酵母膏可減至每升l 克，也可省去氯化鈉。此培養基適用於放線菌的分離、其成分如下：

葡萄糖10 克

酵母膏10 克

牛肉膏0.4克

蛋白腖4 克

NaCl （用子淡水種）2.5克

瓊脂15 克

陳海水（用於鹹水樣品）

或蒸餾水（用於淡水樣品）1000毫升

調pH 至7.2-7.4 , 121 ℃ 蒸汽下滅菌30 分鍾，製成平板，備用。具體製法參考高氏1 號培養基。

② 高氏（Gause )1號斜麵培養基，此種培養基適於放線菌的純化培養。其成分如下；

澱粉（可溶性）20克

KNO3  1 克

MgO2·7H2O   0.5 克

FeSO4·7H2O   0.01 克

K2HPO4   0.5 克

NaCl 0.5克

瓊脂20克

陳海水或蒸餾水1000毫升

pH 7.2-7.4

用少量水將澱粉調成糊狀．取500 毫升煮沸水注入糊狀澱粉中，邊加邊攪拌，使其溶解，除瓊脂外，加入其他成分．溶解後加水至1000 毫升．加入瓊脂，並使其溶化，調pH ，分裝於試管，112 ℃ 蒸汽下滅菌30 分鍾，擺成斜麵，備用．

2 ．分離步驟

① 按上法取10 克泥樣，溶解於90 毫升無菌海水或無菌水中．加10%酚10滴。邊加邊振蕩，使酚及微生物分布均勻。酚在此能抑製細菌的生長。

② 以10倍稀釋法將泥樣衝稀至10^-2和10^-3的懸液．

③ 各取0.1毫升懸液放於澱粉銨平板培養基上．以彎曲玻棒塗勻，每個稀釋度製2 個平板．

④ 倒放培養皿於25-30 ℃ 下培養7-15 天．

⑤ 觀察菌落特征，挑取所需菌落，接種於高氏1 號斜麵培養基作純化培養。

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