第三節 玻璃化問題及其防止
一、玻璃化現象
定義：當植物材料不斷地進行離體繁殖時，有些培養物的嫩莖、葉片往往會呈半透明狀，呈水跡狀，這種現象通常稱為玻璃化。
危害：
①使試管苗生長緩慢、繁殖係數有所下降。玻璃化為試管苗的生理失調症。
②出現玻璃化的嫩莖不宜誘導生根，因此使繁殖係數大為降低。
③呈現玻璃化的試管苗，其莖、葉表麵無蠟質，體內的極性化合物水平較高，細胞持水力差，植株蒸騰作用強，無法進行正常移栽。這種情況主要是由於培養容器中空氣濕度過高，透氣性較差造成的。
在不同的種類、品種間，試管苗的玻璃化程度也有所差異，當培養基上細胞分裂素水平較高時，容易出現玻璃化現象。在培養基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質，能夠在一定程度上減輕玻璃化的現象發生。
二、防治措施
（1）增加培養基中的溶質水平，以降低培養基的水勢；
（2）減少培養基中含氮化合物的用量；
（3）增加光照；
（4）增加容器通風，最好進行CO2施肥，這對減輕試管苗玻璃化的現象有明顯的作用；
（5）降低培養溫度，進行變溫培養，有助於減輕試管苗玻璃化的現象發生；
（6）降低培養基中細胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸。
第四節 其他常見問題和解決措施
一、初始培養階段
1、培養物水浸狀、變色、壞死、莖斷麵附近幹枯
可能原因：表麵殺菌劑過量，消毒時間過長，外植體選用不當（部位或時期）。
改進措施：調換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時間，試用其他部位，生長初期取材。
2、培養物長期培養幾乎無反應
可能原因：基本培養基不適宜，生長素不當或用量不足，溫度不適宜。
改進措施：更換基本培養基或調整培養基成分，尤其是調整鹽離子濃度，增加生長素用量，試用2，4-D，調整培養溫度。
3、愈傷組織生長過旺、疏鬆，後期水浸狀
可能原因：激素過量，溫度偏高，無機鹽含量不當。
改進措施：減少激素用量，適當降低培養溫度，調整無機鹽（尤其是銨鹽）含量，適當提高瓊脂用量增加培養基硬度。
4、愈傷組織太緊密、平滑或突起，粗厚，生長緩慢
可能原因：細胞分裂素用量過多，糖濃度過高，生長素過量。
改進措施：減少細胞分裂素用量，調整細胞分裂素與生長素比例，降低糖濃度。
5、側芽不萌發，皮層過於膨大，皮孔長出愈傷組織
可能原因：枝條過嫩，生長素、細胞分裂素用量過多。
改進措施：減少激素用量，采用較老化枝條。
二、繼代培養階段
1、苗分化數量少、速度慢、分枝少、個別苗生長細高
可能原因：細胞分裂素用量不足，溫度偏高，光照不足。
改進措施：增加細胞分裂素用量，適當降低溫度，改善光照，改單芽繼代為團塊（叢芽）繼代。
2、苗分化過多，生長慢，有畸形苗，節間極短，苗叢密集，微型化
可能原因：細胞分裂素用量過多，溫度不適宜。
改進措施：減少或停用細胞分裂素一段時間，調節溫度。
3、分化率低，畸形，培養時間長時苗再次愈傷組織化
可能原因:生長素用量偏高，溫度偏高。
改進措施：減少生長素用量，適當降溫。
4、葉粗厚變脆
可能原因：生長素用量偏高，或兼有細胞分裂素用量偏高。
改進措施：適當減少激素用量，避免葉片接觸培養基。
5、再生苗的葉緣、葉麵等處偶有不定芽分化出來
可能原因：細胞分裂素用量偏高，或表明該種植物適於該種再生方式。
改進措施：適當減少細胞分裂素用量，或分階段地利用這一再生方式。
6、叢生苗過於細弱，不適於生根或移栽
可能原因：細胞分裂素濃度過高或赤黴素使用不當，溫度過高，光照短，光強不足，久不轉移，生長空間窄。
改進措施：減少細胞分裂素用量，免用赤黴素，延長光照時間，增強光照，及時轉接，降低接種密度，更換封瓶紙的種類。
7、幼苗淡綠，部分失綠
可能原因：無機鹽含量不足，PH值不適宜，鐵、錳、鎂等缺少或比例失調，光照、溫度不適。
改進措施：針對營養元素虧缺情況調整培養基，調好PH值，調控溫度、光照。
8、幼苗生長無力、發黃落葉、有黃葉、死苗夾於叢生苗中
可能原因：瓶內氣體狀況惡化，PH值變化過大，久不轉接導致糖已耗盡，營養元素虧缺失調，溫度不適，激素配比不當。
改進措施：及時轉接、降低接種密度，調整激素配比和營養元素濃度，改善瓶內氣體狀況，控製溫度。
三、生根階段
1、培養物久不生根，基部切口沒有適宜的愈傷組織
可能原因：生長素種類、用量不適宜；生根部位勇氣不良；生根程序不當；PH值不適，無機鹽濃度及配比不當。
改進措施：改進培養程序，選用適宜的生長素或增加生長素用量，適當降低無機鹽濃度，改用濾紙橋液培養生根等。
2、愈傷組織生長過快、過大，根莖部腫脹或畸形，幾條根並聯或愈合。
可能原因：生長素種類不適，用量過高，或伴有細胞分裂素用量過高，生根誘導培養程序不對。
改進措施：調換生長素種類或幾種生長素配合使用，降低使用濃度，附加VB2或PG等減少愈傷，改變生根培養程序等。
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