分解纖維素的微生物的分離

（1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。

（2）纖維素酶是一種複合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長提供營養。

（1）篩選方法

剛果紅染色法。能夠通過顏色反應直接對微生物進行篩選。

（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理

剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色複合物，但並不和水解後的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。當我們在含有纖維素的培養基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色複合物。當纖維素被纖維素酶分解後，剛果紅－纖維素的複合物就無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。

    土壤取樣→選擇培養（此步是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定）→梯度稀釋→將樣品塗布到鑒別纖維素分解菌的培養基上→挑選產生透明圈的菌落

（1）土壤采集

選擇富含纖維素的環境。

（2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟

倒平板操作、製備菌懸液、塗布平板

（3）剛果紅染色法種類

一種是先培養微生 物，再加入剛果紅進行顏色反應，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。

土壤中纖維素分解菌的分離實驗的具體操作步驟如下。

1.土樣采集

土樣采集的方法與本專題課題2類似。土樣的采集要選擇富含纖維素的環境，這是因為在纖維素含量豐富的環境，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環境，可以將濾紙埋在土壤中，過一個月左右也會有能分解纖維素的微生物生長。

2.選擇培養

選擇培養需要的儀器有：250mL錐形瓶、無菌稱量瓶、藥匙、1mL和10mL的移液管、天平、搖床、溫度計等。

培養基的製備參照課本旁欄中的比例配製。在250mL錐形瓶中裝入30mL培養基，用8層紗布做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層包裝紙（或報紙），用線繩紮緊，在121℃下高壓蒸汽滅菌20m in。

選擇培養的操作：稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養基的搖瓶中。將搖瓶置於搖床上，在30℃下振蕩培養1～2d，至培養基變混濁。此時可以吸取0.1mL培養液進行梯度稀釋和塗布平板，也可以按課本中所述，重複選擇培養的步驟一次，然後再進行梯度稀釋和塗布平板。

3.剛果紅染色法分離

纖維素分解菌這一步所需要的儀器有：無菌培養皿、塗布器、1mL移液管，裝有9mL無菌水的20mL大試管，溫箱等。

培養基的製備參照課本旁欄中的比例 配製。在500mL三角瓶中裝入200mL培養基，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。

製備菌懸液：按照本專題課題1的稀釋操作方法，將選擇培養後的培養基進行等比稀釋，稀釋最大倍數至10⁶。