沙門氏菌檢驗（4）
錄入時間:2010-9-20 8:22:01
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三、培養基
（一）緩衝蛋白腖水
成分：蛋白腖 10g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 9g
磷酸二氫鉀 1.5g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
按上述成分配好後，裝入大燒瓶，121℃高壓滅菌，臨用時無菌分裝每瓶225mL，供沙門氏菌前增菌用。
（二）氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液
成分：甲液：胰蛋白腖 5g
氯化鈉 8g
磷酸二氫鉀 1.6g
蒸餾水 1000mL
乙液：氯化鎂（化學純） 40g
蒸餾水 100mL
丙液：0.4％孔雀綠水溶液
製法：分別按上述成分配好，121℃高壓滅菌15min備用，臨用時取甲液90mL，乙液9mL，丙液0.9mL，以無菌操作混合即可。
（三）四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液
成分：多腖或月示腖 5g
膽鹽 1g
碳酸鈣 10g
硫代硫酸鈉 30g
蒸餾水 1 000mL
製法：將上述各成分加入蒸餾水，加熱溶解，分裝每瓶100mL中加入碘溶液2mL，0.1％煌綠溶液1mL。
碘溶液配製：碘6g，碘化鉀5g，蒸餾水20mL。
（四）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液
成分：蛋白腖 5g
乳糖 4g
亞硒酸氫鈉 4g
磷酸氫二鈉 5.5g
磷酸二氫鉀 4.5g
L－胱氨酸 0.01g
蒸餾水 1 000mL
製法：將除亞硒酸氫鈉和L－胱氨酸以外的各成分溶解於900mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷備用，另將亞硒酸氫鈉溶解於100mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷，以無菌操作與上液混合。再加入1％L~胱氨酸~氫氧化鈉溶液1mL。分裝於滅菌瓶中，每瓶100mL，pH應為7.0±0.1。
1％L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱取L-胱氨酸0.1g（或DL-胱氨酸0.2g），加1N氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。
（五）亞硫酸鉍瓊脂（BS）
成分：蛋白腖 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亞鐵 0.3g
磷酸氫二鈉 4g
煌綠 0.025g
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 6g
瓊脂 18~20g
蒸餾水 1000mL
pH7.5
製法：將前5種成分溶解於300mL蒸餾水中，將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解，將瓊脂於600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80℃，將以上三液合並，補充蒸餾水至1000mL，校正pH，加0.5％煌綠水溶液5mL搖勻，冷至50~55℃傾注平板。
注：此培養基不需高壓滅菌，製備過程中不宜過分加熱，以免降低其選擇性，應在臨用前一天製備，貯存於室溫暗處，超過48h，不宜使用。
（六）DHL瓊脂（Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar）
成分：蛋白腖 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧膽酸鈉 1g
硫代硫酸鈉 2.3g
檸檬酸鈉 1g
檸檬酸鐵銨 1g
中性紅 0.03g
瓊脂 18~20g
蒸餾水 1000mL
製法：除中性紅和瓊脂以外的成分溶解於400mL蒸餾水中，校正pH為7.3，再將瓊脂於600mL蒸餾水中煮沸溶解，兩液合並，加入0.5％中性紅水溶液6mL，待冷至50~55℃傾注平板。
（七）HE瓊脂（Hektoen Enteric Agar）
成分：月示腖 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水楊素 2g
膽鹽 20g
氯化鈉 5g
瓊脂 18~20g
蒸餾水 1000mL
0.4％溴麝香草酚藍溶液 16mL
Andrade指示劑 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
製法：將前7種成分溶解於400mL蒸餾水內為基礎液，將瓊脂加入於60mL蒸餾水內，加熱溶解，加入甲液和乙液於基礎液內，校正pH，再加入指示劑，並與瓊脂合並，待冷至50~55℃傾注平板。
注：①此培養基不可高壓滅菌。
②甲液的配製：
硫代硫酸鈉 34g
檸檬酸鐵銨 4g
蒸餾水 100mL
③乙液的配製：
去氧膽酸鈉 10g
蒸餾水 100mL
④Andrade指示劑：
酸性複紅 0.5g
1N氫氧化鈉溶液 16mL
蒸餾水 100mL
將複紅溶解於蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液，數小時後中複紅褪色不全，再加氫氧化鈉溶液1~2mL。
（八）SS瓊脂
1. 基礎培養基
成分：牛肉膏 5g
月示腖 5g
三號膽鹽 3.5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
製法：將牛肉膏、月示 腖和膽鹽溶解於400mL蒸餾水中，將瓊脂加入於600mL蒸餾水中，煮沸，使其溶解，再將兩液混合，121℃高壓滅菌15min，保存備用。
2. 完全培養基
成分：基礎培養基 1000mL
乳糖 10g
檸檬酸鈉 8.5g
硫代硫酸鈉 8.5g
10％檸檬酸鐵溶液 10mL
1％中性紅溶液 2.5mL
0.1％煌綠溶液 0.33mL
製法：加熱溶化基礎培養基，按比例加入上述染料以外的各成分，充分混合均勻，校正pH至7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。
注：① 製好的培養基宜當日使用，或保存冰箱內於48h內使用。
② 煌綠溶液配好後應在10d以內使用。
③ 可以購用SS瓊脂的幹燥培養基。
（九）三糖鐵瓊脂
成分：蛋白腖： 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵銨[Fe（NH4）2（SO4）2·6H2O]0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
製法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解於蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂煮沸溶化，加入0.2％酚紅水溶液12.5mL，搖勻，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜麵備用。
（十）蛋白腖水（靛基質試驗用）
萬分：蛋白腖（或胰蛋白腖） 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
製法：按上述成分配製，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。
靛基質試劑：
柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶於75mL戊醇中，然後緩慢加入濃鹽酸25mL。
歐-波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解於95mL95％酒精內，然後緩慢加入濃鹽酸20mL。
試驗方法：接種培養物36±1℃培養1~2d，加柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽性者於試劑層呈深紅色。或加歐-波試劑約0.5mL，沿管壁下覆蓋於培養基表麵，陽性者於液麵接觸處呈玫瑰紅色。
注：蛋白腖中應含有豐富的色氨酸，每批蛋白腖應先用已知菌種鑒定後方可使用。
（十一）尿素瓊脂（pH7.2）
成分：蛋白腖 1g
氯化鈉 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氫鉀 2g
0.4％酚紅溶液 3mL
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
20％尿素溶液 100mL
pH7.2
製法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，校正pH，加入瓊脂煮沸溶化，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min，冷至50~55℃加入經除菌過濾的尿素溶液，分裝於滅菌試管內，放成斜麵備用。
試驗方法：接種培養物36±1℃培養24h，觀察結果，尿素酶陽性者，由於產堿而使培養基變為紅色。
（十二）氰化鉀（KCN）培養基
成分：蛋白腖 10g
氯化鈉 5g
磷酸二氫鉀 0.225g
磷酸氫二鈉 5.64g
蒸餾水 1000mL
0.5％氰化鉀溶液 20mL
pH7.6
製法：將除氰化鉀以外的成分配好，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min，放在冰箱內使用其充分冷卻，每100mL培養基加入0.5％氰化鉀溶液2mL（最後濃度為1:10000），分裝滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放4℃冰箱保存，同時將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基，分裝試管備用。
（十三）氨基酸脫羧酶試驗培養基
成分：蛋白腖 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000mL
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液 1mL
L-氨基酸或DL氨基酸 0.5或1g/100mL
製法：除氨基酸以外的成分加熱溶解後，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L-氨基酸按0.5％加入，DL-氨基酸按1％加入，校正pH至6.8，對照培養基不加氨基酸，分裝於滅菌的小試管內，每管0.5mL，上麵加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。
試驗方法：接種培養物於36±1℃培養18~24h，觀察結果，氨基酸脫羧酶陽性者，由於產堿培養基應呈綠色，陰性者無堿性產物，但因葡萄糖產酸而使培養基變為黃色，對照管應為黃色。
（十四）糖發酵管
成分：牛肉膏 5g
蛋白腖 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉 2g
0.2％溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
製法：葡萄糖發酵管按上述成分配好後，按0.5％加入葡萄糖，分裝於有倒管的試管內，121℃高壓滅菌15min。其他各種糖發酵管，可按上述成分配好後分裝好後分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min，另將各種糖類分別配成10％溶液，同時高壓滅菌，將5mL糖溶液加入於100mL培養基內，以無菌操作分裝小試管。
注：蔗糖不純，加熱後會自行水解者，應采用過濾法除菌。
（十五）ONPG培養基
成分：鄰硝基酚β-D半乳糖苷（O~nitrophenyl
β-D-galactopyranoside ONPG） 60mg
0.01mol/L磷酸鈉緩衝液（pH7.5） 10mL
1％蛋白腖水（pH7.5） 30mL
製法：將ONPG溶於緩衝液內，加入蛋白腖水，以過濾法除菌，分裝試管，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。
試驗方法：由瓊脂斜麵上挑取培養物1滿環接種，於36±1℃培養1-3h或24h觀察結果，如果β-半乳糖苷酶產生，由於1-3h變黃色，如無此酶則24h不變色。
（十六）半固體瓊脂
成分：蛋白腖 1g
牛肉膏 0.3g
氯化鈉 0.5g
瓊脂 0.35~0.4g
蒸餾水 100mL
製法：按上述成分配好，煮沸溶解，校pH為7.4，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min，直立疑固備用。
（十七）緩衝葡萄糖蛋白腖水（MR和V-P試驗用）
成分：磷酸氫二鉀 5g
多腖 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
製法：溶化後校正pH，分裝試管，每管1~2mL，121℃高壓滅菌15min。
甲基紅試驗：接種培養物於36±1℃培養2~4天，滴加試劑一滴，立即觀察結果，鮮紅色為陽性，黃色為陰性。
甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶於30mL乙醇中，然後加入20mL蒸餾水。
V-P試驗：接種培養物於36±1℃培養2~4天，加入6％α-萘酚酒精溶液0.5mL和40％氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖觀察結果，陽性者立刻或數分鍾呈紅色，如陰性時應於36℃培養4h再進行觀察。
（十八）丙二酸鈉培養基
成分：酵母膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2％溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
製法：先將酵母浸膏和鹽類溶解於水，校正pH後再加指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。
接種培養物於36±1℃培養48h，陽性者由綠色變為藍色。
（十九）氧化酶試驗
1％鹽酸二甲基對苯二胺溶液：小量新鮮配製，於冰箱內避光保存。
1％α-萘酚乙醇溶液。
試驗方法：取白色潔淨濾紙沾取菌落，加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈現粉紅色，並逐漸加深，再加α-萘酚溶液一滴，陽性者於半分鍾內呈現鮮藍色，陰性於2min內不變。
以毛細吸管吸取試劑，直接滴加於菌落上，其顯色反應與以上相同。
（二十）WS瓊脂
成分：
月示腖 12g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸鈉 2g
瓊脂 15g
Andrade指示劑 20mL
0.4％溴麝香草酚藍溶液 16mL
甲液 20mL
蒸餾水 1000mL
pH7.0
製法：
除指示劑和甲液外，將其他成分加熱溶解，不需消毒，校正pH後加入指示劑和甲液，傾注平板，應呈草綠色。
注：①供沙門氏菌分離用。
②Andrade指示劑和甲液的配製均見HE瓊脂。
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