1.細菌特性
(1)形態染色 革蘭陰性杆菌,無芽胞,無莢膜,有端鞭毛或側鞭毛,動力陽性。
(2)培養特性 能在細胞內生長繁殖,專性需氧,同時生長環境中還需2.5%~5%的二氧化碳;其生長的pH範圍較窄,最適pH6.4~7.2,在pH1.7時則死亡;最適生長溫度
不同培養基上菌落的形成和表現不同,目前公認的最適宜培養基是緩衝活性炭酵母浸出液,加上鐵、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸(在不含L-半胱氨酸的BCYE和血平板上不生長),稱之為BCYEa(buffered charcoal-yeast extract agar)培養基。
(3)生化反應 生化反應可作為鑒定時的參考,大多數菌種能產生β內酰胺酶和液化明膠、水解澱粉,觸酶陽性,氧化酶弱陽性;硝酸鹽還原、尿素酶和碳水化合物利用反應都是陰性;所有嗜肺軍團菌血清型(血清型4和15除外)的各個菌株均具有極強的水解馬尿酸鹽的作用,而其他軍團菌則陰性。
(4)抵抗力 軍團菌已成為天然水環境中常在的一大類菌群,嗜肺軍團菌的生存能力較強,在含有藻類物質的氣溶膠中可長期存活,對紫外線敏感,對熱和常用的化學消毒劑敏感。
2.臨床意義
軍團病在世界各地均有發病,但主要在經濟發達國家流行,國內多屬散發報道。本菌廣泛存在於土壤及自然和人工的水環境中,尤其是在空調冷凝水中的檢出率最高。大多數病例(85%)是嗜肺軍團菌引起的,其中嗜肺軍團菌1血清型和6血清型占75%。高發於夏秋季,細菌通過空氣傳播,易侵犯患有慢性器質性疾病或免疫功能低下的患者,最常見的是肺炎型。
3.微生物學檢驗
(1)檢驗程序 。
(2)標本采集 標本應小心收集避免氣溶膠的形成,最好於收集後兩小時內用無菌防漏容器在環境溫度下小心送到實驗室。
1)適用的標本主要包括 咳出的痰、用支氣管鏡收集的材料、經氣管吸出物、胸腔積液和血液等。除胸水和血液外,其他標本中均混有正常菌群及其他病原菌,正常菌群對軍團菌有殺滅作用,取材後應及時分離培養,並使用加抗生素的選擇培養基。
2)病理組織標本 如閉合或開放的肺活檢材料、屍體標本及實驗動物的肝、脾等標本必須製成懸液,再進行塗片和分離培養。
3)環境汙染標本 如水、土壤等,水標本應先濃縮再接種,土壤標本加入水中振蕩30min取水樣,參照水標本處理。
(3)檢驗方法
1)顯微鏡檢查 標本直接塗片革蘭染色,意義不大。
2)分離培養 本菌營養要求苛刻,生長緩慢,在
3)鑒定 在血平板、巧克力平板及不含L半胱氨酸的BCYE平板上不生長,而在含有L半胱氨酸的BCYE和F-G培養基上生長緩慢、形成典型菌落;革蘭陰性小杆菌,有顯著的多形性,均應懷疑為軍團菌。對可疑菌株可作直接熒光抗體染色等血清學鑒定和生化反應,必要時作細菌脂肪酸的氣液相色譜分析和DNA雜交、PCR試驗。
4)免疫學檢測 檢測軍團菌血清抗體的方法主要有間接免疫熒光染色(IFA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及放射免疫測定等,其中以IFA在臨床應用最多。急性期和恢複期雙份血清抗體效價增加4倍以上並達≥1:128或單份血清抗體效價達到或超過1:256為陽性。本法取恢複期血清需時較久(1~3個月),且可能與其他細菌的抗體起交叉反應。
5)核酸檢測 是快速特異方法,常用DNA探針和PCR方法檢測軍團菌rRNA,可用於軍團菌的快速診斷。
(4)耐藥性 軍團菌體外抗生素敏感性試驗尚無統一標準,且與臨床治療反應不一致,因此,並不主張對醫院診斷實驗室分離的軍團菌進行體外抗生素敏感性試驗。目前已取得明顯臨床效果的抗菌藥物主要是大環內酯類藥物、利福平、氟喹諾酮類藥物,其次是四環素類。青黴素、頭孢菌素、氨基糖苷類抗生素治療本菌無效。
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