芽孢杆菌在肉雞腸道中的生活狀態和分布

芽孢杆菌在肉雞腸道中的生活狀態和分布

張大偉¹  王少傑¹  郝永任¹  楚傑¹  韓秋霞²  宿英德³

(¹山東省應用微生物重點實驗室，山東省科學院中日友好生物中心，濟南，250014，

²山東科技大學，³濟南大吉飼料有限公司)

摘要  本研究以20日齡AA肉雞為研究對象，分別一次性或持續添加飼喂不同的芽孢菌劑，對雞糞中芽孢數量的測定結果顯示：飼喂菌劑後2-4小時，雞糞中開始檢測到芽孢的存在，12-20小時達到最高值，直至飼喂80小時後，腸道內的芽孢基本排除。排出芽孢總量為飼喂芽孢總數的2.5-3.0倍，表明三種芽孢均在腸道內可以萌發，並可進行生長繁殖。對腸道不同部位中活性芽孢菌體數量的測定結果表明：芽孢進入小腸後即可開始萌發，並進行生長繁殖，在回腸附近達到高峰。

關鍵詞  芽胞杆菌；肉雞腸道；芽孢萌發；分布

芽孢杆菌在自然界中廣泛存在於土壤、空氣和水中，而且數量豐富。芽孢菌劑作為益生菌或腸道競爭抑製劑，除了可以改善、調整腸道菌群外，還可抑製有害細菌在腸道內膜的吸附和定殖^[1]，飼喂動物日糧中添加一定比例的芽孢菌劑，還可明顯降低料肉比。目前，芽孢菌劑在人和動物腸道疾病的防治中均取得了較好療效，應用的菌株主要為枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和蠟樣芽胞杆菌等。芽孢菌劑中，菌體主要以芽孢的形式存在，菌劑具有耐熱、抗幹燥等優點，便於運輸和使用，但對於芽孢菌在人或動物腸道中的生活狀態及其作用機理，也成為國際學術界研究的熱點。

Losick等於1998年首次展示了Metabacterium polyspora在豚鼠腸道中萌發和芽孢形成的電鏡照片^[2]，雖然，隨後也有研究報道，沒有在試驗小鼠腸道中發現萌發的芽胞菌體^[3]，但Simon等研究小組則通過對實驗小鼠糞便中對芽孢的數量檢測，利用RT-PCR，檢測隻在萌發芽孢菌體中表達的融合蛋白fisH-lacZ等研究結果，確定了芽孢可以在小鼠的小腸腸道內萌發，並進行一定的生長繁殖^[4]，最新的研究結果顯示，枯草芽孢杆菌的芽孢，不但可以在動物的腸道內完成芽孢萌發、生長繁殖和芽孢形成等完整的生活周期，而且，芽孢形成時間較體外實驗條件下縮短一半的時間，同時，利用分子手段還證實了芽孢和萌發的菌體均可吸附在實驗動物的腸道內膜表麵，並可激發免疫活性，同時該研究還在國際上首提出了芽孢杆菌也屬於動物腸道微生態環境的一個組成成分^[5]。

以上方麵的研究在我國尚屬空白，為了使各類芽孢益生菌劑在我國畜牧養殖業中得到更好的應用，本研究以AA肉雞為試驗對象，通過對試驗肉雞糞便所含芽孢數量的分析和檢測腸道各部位萌發菌體的數量，推斷不同芽孢在肉雞腸道中的萌發和生長狀態。

1  材料和方法

1.1  材料

1.1.1  試驗肉雞

20日齡AA肉雞，網養，雞糞中芽孢含量測定實驗，共分4組，每組6隻，腸道內容物芽孢菌體含量測定試驗，分4組，每組2隻，分組及試驗條件見表1。

1.1.2  試驗基礎日糧為濟南正大公司肉雞全價飼料。

1.1.3  芽胞菌劑由濟南大吉飼料有限公司提供，菌劑芽孢含量均為20×10⁸ CFU/克。

表1  試驗分組及其飼喂條件

1.2  試驗方法

1.2.1  雞糞中芽孢數量的測定

分別收集每組中不同取樣時間的所有雞糞樣品，樣品用1000 ml生理鹽水懸浮，經勻漿後，75℃熱處理20分鍾，震蕩搖勻後，取1 ml，用生理鹽水稀釋一定倍數，LB培養基平板塗布100 ul，37℃培養36小時後進行菌落計數。

樣品芽孢含量（10⁸ CFU）=菌落數×稀釋倍數×10×1000/6×10⁸

1.2.2  肉雞腸道中活性菌體數量的測定

試驗肉雞持續飼喂添加芽孢菌劑的日糧2天後，同時宰殺並解剖所有試驗肉雞，取出雞腸，將每隻雞的腸道分為七段。其中包括十二指腸2段，小腸4段，盲腸1段。對各段腸道內壁分別用100ml已滅菌的生理鹽水進行衝洗，收集洗液，合並同組的相同腸道部位的樣品，勻漿攪勻，每段腸道內容物樣品各取1 ml，一份直接稀釋至一定倍數後，取100 ul塗布LB平板, 37℃培養36小時後進行菌落計數；另一份樣品75℃熱處理20分鍾後，用生理鹽水稀釋相同倍數後，取100 ul進行平板計數。

樣品活性菌體數量（10⁸ CFU）

=（未熱處理樣品菌落數 —熱處理樣品菌落數）×稀釋倍數×10×200/2×10⁸

2  實驗結果

2.1  雞糞中芽孢數量的測定結果

2.1.1  不同取樣時間的雞糞樣品中芽孢的數量測定結果

2.1.2  雞糞樣品中的芽孢總數

將每組平均每隻雞的所有雞糞樣品中的芽孢數量累加後，為平均每隻雞的排出體外的芽孢總數，計算結果見表2。

表2：平均排出芽孢總數的計算結果

 表3  不同腸道區段活性菌體數量測定結果(10⁸ CFU)

2.2  芽孢的活性菌體在肉雞腸道中的分布

2.2.1 肉雞腸道不同區段中活性菌體數量的測定結果（表3）

2.2.2  肉雞腸道內已萌發的活性菌體分布檢測結果

3  結果討論

3.1  雞糞樣品芽孢數量的測定結果如下：

實驗肉雞飼喂芽孢菌劑2-4小時後，雞糞中開始檢測到飼喂芽孢的存在，直至80小時後，腸道中的芽孢基本全部排出，證明芽胞菌在試驗肉雞腸道中有所滯留，同時排出的芽孢總數比飼喂芽孢總數提高了1.5-2倍，證明芽孢在腸道內能夠萌發，並進行了一定程度的生長繁殖。

3.2 對試驗肉雞不同腸道部位的活性菌體數量的測定結果如下：

芽孢在試驗肉雞的小腸內開始萌發，並進行了繁殖，在小腸的後端數量達到高峰後，又重新轉入休眠體的芽孢狀態，完成了一個生活周期；試驗所取的小腸3和小腸4部位，即回腸附近可能是芽孢杆菌的主要生長繁殖和滯留場所。

3.3  地衣芽孢杆菌BL和枯草杆菌BA在小腸的萌發部位較另一株地衣芽孢杆菌KB2提前，而且三種芽孢杆菌在小腸中的主要繁殖部位也略有不同，此結果預示複合芽孢製劑可能取得更好的應用效果。

參 考 文 獻（略）

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