微生物檢測中培養基的質量控製措施
關鍵詞:培養基質量控製微生物檢測
培養基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用於保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基的製備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節,培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配製使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、製備、使用等方麵應采取的質量控製措施進行討論,談一些觀點和看法。希望有助於微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
1培養基的購置與驗收
1.1購置
從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異[1]。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應 企業 進行評價後選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體係的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料[2]。
1.2驗收
購買的培養基到貨後,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物後都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求後方可投入使用。
2培養基的儲存
幹粉培養基應保存在陰涼幹燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年,開瓶後的幹粉培養基易吸濕,應注意防潮並在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性複查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
3培養基的製備
3.1培養基用水
培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。
3.2稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉汙染而影響檢驗結果;幹粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.3複水
複水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞,並可產生有毒物質,如發現焦化,或未溶解均勻前培養基有溢出,該培養基即不能使用,應重新製備。對於瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多隻能加熱兩次,第二次再融化後仍未用完的培養基應棄去。
3.4滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是
3.5pH測定
微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH值,即培養基使用前的pH,並應在
3.6配製好的培養基保存
滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配製的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完,應於冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發[4]。
4培養基的性能測試
4.1外觀控製
製備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉澱。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。
4.2汙染控製
從每批製備好的培養基中選取部分進行汙染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。4.3性能測試
4.3.2定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域並標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液於試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液塗滿整個1/4區域,
4.3.3半定量測試方法改進的劃線法接種法平板分ABCD四區,共劃16條線,平行線大概相隔
4.3.4定性測試方法平板接種觀察法用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表麵劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種後的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,並有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長[6]。
5討論
培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題,都將導致檢驗結果 科學 性、客觀性的偏離。因此,加強培養基的實驗室質量控製,認真地做好培養基的質控工作,不斷完善和提高培養基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。
參考 文獻
[1]唐細良,史娟,唐紫琳,等.影響衛生微生物檢驗質量的兩個因素研究[J].實用預防醫學,2000,7(4):314-315.
[2]ISO/TS11133-1:2000.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Guidelinesonpreparationandproductionofculturemedia-Part1:Generalguidelinesonqualityassurancefortheprepatationofculturemediainthelaboratory[S].
[3]劉春梅,蔡芷荷,吳清平.食品衛生微生物檢驗中培養基的質量控製[J]. 中國 衛生檢驗雜誌,2007,17(4):700-701.
[4]饒紅,陳廣全,馮騫,等.微生物實驗室培養基的質量保證措施[J].檢驗檢疫科學,2006,6(4):31-33.
[5]WS/T232-2002.商業性微生物培養基質量檢驗規程[S].
[6]ISO/TS11133-2:2003.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Guidelinesonpreparationandproductionofculturemedia-Part2:Praticalguidelineonperformancetestingofculturemedia[S].
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