結核杆菌培養采用羅－琴培養基，為防止培養基幹裂，可加入適量甘油，在1600ml的培養基中加入甘油12ml。
羅－琴培養基成分：
磷酸二氫鉀
具體配製方法如下：
1、加熱上述重量的溶解磷酸鹽，硫酸鎂，拘掾酸鎂，天門冬素和甘油於600ml蒸餾水中。
2、一邊攪拌一邊加入馬鈴薯澱粉，於沸水中水溶1小時，在置於56度水浴箱內1小時。
3、將新鮮雞蛋洗淨後，在75％乙醇中消毒30分鍾，去除後點火燒掉雞蛋外殼上的乙醇，無菌打破蛋殼，將蛋白和蛋黃收集於滅菌容器內，充分攪拌，無菌紗布過濾，在收集新鮮雞蛋液1000ml；加入上述混合液中。
4、加入滅菌的2％孔雀綠水溶液，均勻混合，分裝於滅菌的試管內，加塞封閉，斜置於血清凝固器內，85度1小時間歇滅菌2次。於冰箱保存備用。
結合杆菌的計數
結核菌生長緩慢且難於培養，不適於用平板培養，一是易汙染環境，二是培養時間長了，平板會很快幹掉。因此結核菌的cfu測定不能象大腸菌那樣采用平板菌落計數法。一般很少有人做結核菌的cfu計數，如果一定要做，可用Middlebrook7H9液體培養基依次稀釋，再接種於羅氏斜麵培養基或Middlebrook7H10，計數可見到單菌落的培養斜麵上的菌落數，計算出cfu。
一般斜麵麵積可達4~5平方厘米，隻要稀釋菌液中的活菌數足夠少，就肯定可得到可目測出的單菌落數（n）。假設每個稀釋度菌液的體積為v1，接種體積為V2，則cfu/ml=n×V1×稀釋倍數/V2.
已培養出的結核菌菌落，可用一玻璃試管，加幾顆玻璃珠，1ml生理鹽水，一起高壓蒸汽滅菌。然後，挑取菌落到此試管中，振搖以獲得均勻菌懸液，再稀釋成所需麥氏濁度。還可將已分純的細菌接種到7H9肉湯培養基培養，待菌生長後再根據你的需要稀釋成一定麥氏濁度的菌液。因Middlebrook 7H9 brooth添加了OADC及吐溫-80，不但營養豐富，而且細菌可呈均勻生長。
結核菌與一般細菌不一樣，容易形成菌團，接種前應研磨均勻，製備1mg/ml菌懸液後用10倍稀釋，如果沒經驗，多接幾個稀釋度，每個稀釋度最少3支，每支接種0.1ml，計算最後長滿的不計算,可計數稀釋度菌落就可以，一般合格培養基培養每毫克結核杆菌約1-2千萬活菌。
如果第1次做，可以拿卡介苗(0.5mg/支)當對照（2-10百萬cfu/mg），以確定實驗方法無誤。
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