幽門螺杆菌感染的現行臨床診斷檢測技術（下）

錄入時間:2010-10-25 8:49:40 來源：螺旋杆菌臨床研究進展

2 唾液幽門螺杆菌抗原檢測技術
目前用唾液檢測口腔內幽門螺杆菌的抗原技術,有唾液抗原ELISA檢測法(ELISA雙抗體夾心法),及我們Ameritek公司研發的唾液幽門螺杆菌抗原檢測技術,此技術是我們研究團隊在過的10餘年裏研究和開發的一種新的、快速的診斷檢測方法。這種方法在幽門螺杆菌侵入人體後,在病症初期就可以把它檢測出來。此新的檢測技術的產品稱"胃幽門螺杆菌唾液測試板(HPS),我們團隊已獲得技術專利,及中國和歐洲食品藥品監督管理局的注冊證書^(12,13)。我們公司是一家專業從事體外診斷試劑產品研發、生產和銷售的高科技生物公司。我們有設備先進、技術力量雄厚的螺旋杆菌實驗室,我們的實驗室是世界上少數能大規模培養幽門螺杆菌和收集其鞭毛的實驗室,能製備純化尿素酶(含CagA)抗原和抗體,實驗室為我們提供了研發和生產幽門螺杆菌快速診斷試劑和殺滅幽門螺杆菌藥物的可能性。
2.1 HPS檢測法的原理:HPS檢測法是采用純化尿素酶抗體,應用膠體金層析式雙抗體夾心法技術,定性檢測唾液中幽門螺杆菌釋放的尿素酶抗原，從而診斷胃和口腔幽門螺杆菌感染,是一種靈敏度高、能夠特異性診斷人體幽門螺杆菌感染的快速試劑。
2.2 HPS檢測法的使用方法:將體溫表式的測試卡長端放在舌下吸取唾液,或將唾液吐在收集杯內作為測試標本。將標本滴在測試板收集口之後10分鍾左右,在觀察窗口出現一條紅線為陰性,出現二條紅線為陽性。
2.3 HPS檢測法與常用幽門螺杆菌檢測方法的比較:(1)Ameritek公司的HPS檢測法與胃粘膜組織切片W-S銀染鏡檢比較,39例有上消化道症狀的初診成年患者,內鏡檢查前接受HPS檢測,內鏡下胃幽門竇部粘膜活檢組織W-S銀染直接觀測幽門螺杆菌。39例中HPS陽性29例(74.4%),切片染色鏡檢陽性25例(64.1%),在切片染色鏡檢陽性25例中HPS陽性21例(84%)。(2)Ameritek公司的HPS檢測法與C¹⁴尿素呼氣試驗比較,169例消化科門診初診成年病人,接受HPS檢測後即進行C¹⁴尿素呼氣試驗。169例中HPS陽性124例(73.4%), C¹⁴尿素呼氣試驗陽性73例(43.2%),在C¹⁴尿素呼氣試驗陽性73例中HPS陽性71例(97.3%)。(3)Ameritek公司的HPS檢測法與血清抗體測定比較,44例有上消化道症狀的成年患者,接受HPS檢測後采血測定血清中Hp-IgG、IgM抗體。44例中HPS陽性35例(79.5%),血清總抗體陽性39例(88.6%),在總抗體陽性39例中35例HPS陽性(89.7%)。三組有上消化道症狀的成年患者,HPS陽性率分別為74.4%、73.4%、79.5%；切片染色鏡檢、尿素呼氣試驗、血清總抗體陽性率分別為64.1%、43.2%、88.6%；切片染色鏡檢、尿素呼氣試驗、血清總抗體陽性者,HPS陽性率分別為84%、97.3%、89.7%。以上結果顯示:采用HPS檢測法,口腔幽門螺杆菌檢出率高於胃內幽門螺杆菌檢出率,胃內幽門螺杆菌檢測陽性者,口腔幽門螺杆菌檢出率尤高。

2.4 胃與口腔幽門螺杆菌感染的相關性自從1989年Krajden等首次成功地從胃炎病人牙菌斑中分離培養出幽門螺杆菌以來,關於口腔作為胃外幽門螺杆菌另一聚居地的假設倍受人們關注。近年來,國內外學者有關胃幽門螺杆菌感染與口腔幽門螺杆菌感染相關性的研究報道頗多,主要集中在口腔是幽門螺杆菌常棲居區域之一,還是含有幽門螺杆菌胃液返流口腔所致尚存在爭議。常用於檢測幽門螺杆菌的"金標準",如牙菌斑或唾液細菌培養和口腔粘膜括片染色鏡檢,尚難以在口腔中作出與胃內相同且穩定的結果。口腔中菌群的複雜性可能是影響從口腔中分離出幽門螺杆菌的重要因素,另一個影響結果的因素是幽門螺杆菌在口腔中分布不均勻。陳發明等⁽¹⁴⁾發現齲病部位牙菌斑幽門螺杆菌陽性率明顯高於非齲病部位的牙菌斑。盡管幽門螺杆菌是否在口腔中定棲尚未有結論,但胃和口腔幽門螺杆菌感染的相關性已得到多數學者認同。Wang等⁽¹⁵⁾用PCR法檢測31例胃病患者的胃粘膜組織與其唾液中4種不同幽門螺杆菌基因型,CagA、VacAm1、VacAm2以及VacAS1,結果顯示,95%的胃粘膜與其相應唾液至少一種幽門螺杆菌基因型相同,80% 2種基因型一致,59% 3種基因型一致,27% 4種基因型均一致。彭惠等⁽¹⁶⁾用SSCP-PCR法檢測到胃粘膜和唾液中幽門螺杆菌的兩種VacA基因型的一致性為98%。提示口腔和胃內幽門螺杆菌具有同源性。李明等⁽¹⁷⁾采用光鏡下塗片或切片染色和快速尿素酶試驗聯合檢測的方法,對口腔和胃內幽門螺杆菌同步檢測結果顯示,口腔中幽門螺杆菌檢出率為90.56%(326/360),胃內幽門螺杆菌檢出率為70%(252/360%)(P<0.005)。顯示口腔與胃內幽門螺杆菌同步檢測結果,口腔中幽門螺杆菌檢出率明顯高於胃內檢出率,提示口腔中幽門螺杆菌可能是胃內幽門螺杆菌的重要來源。Miyabayashi等⁽¹⁸⁾研究47例幽門螺杆菌陽性胃病患者,根除治療後用巢式PCR檢測唾液中HpDNA,結果發現,唾液中幽門螺杆菌陽性患者其根治率(12/23,52.1%)明顯低於唾液幽門螺杆菌陰性患者(22/24,91.6%)(P<0.05)。隨訪2年,唾液中幽門螺杆菌陽性組胃病緩解率為69.5%,陰性組為95.8%(P<0.05)。侯海玲等⁽¹⁹⁾觀察58例胃粘膜尿素酶試驗陽性患者,其中W-S銀染陽性56例(96.5%),細菌培養陽性49例(84.5%)。此58例胃幽門螺杆菌感染者,口腔牙菌斑或漱口液尿素酶試驗至少一項陽性25例(43.1%)。58例經根除治療後4周接受胃幽門螺杆菌檢測,胃和口腔幽門螺杆菌均陽性的25例中,有9例胃中再次檢出幽門螺杆菌,其根除率64%(16/25),低於口腔幽門螺杆菌陰性者的根除率72.7%(24/33(P<0.05)。1年後口腔幽門螺杆菌陽性者的胃根除率下降為36%(9/25),顯著低於口腔陰性者的63.6%(21/33)(P<0.05)。口腔內幽門螺杆菌的存在,可影響根除治療的療效,並且可能是胃病複發的一個重要因素。

2.5 HPS檢測法的臨床應用及評價:作者曾在浙江大學醫學院附屬笫一醫院等多個單位做了臨床實驗,結果如下:(1)126例有上消化道症狀的初診患者,進行HPS檢測後,同步接受內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗、切片W-S銀染鏡檢或14C尿素呼氣試驗,HPS陽性率為73.02%(92/126),尿素酶試驗、銀染鏡檢和呼氣試驗總陽性率為53.17%(67/126),67例尿素酶試驗、銀染鏡檢或呼氣試驗陽性患者HPS陽性率為70.15%(47/67)。(2)129例內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗和/或切片W-S銀染鏡檢證實胃幽門螺杆菌感染的患者,接受PPI三聯7天療法,療程結束後至少4周進行C¹³或C¹⁴尿素呼氣試驗,同步作HPS檢測,HPS陽性率為75.97%(98/129),呼氣試驗總陽性率為34.11%(44/129),44例呼氣試驗陽性患者HPS陽性率為88.64%(39/44)。(3)33例無上消化道症狀的誌願者,檢測HPS後同步接受C¹⁴尿素呼氣試驗,HPS陽性率為81.82%(27/33),呼氣試驗陽性率為21.21%(7/33),7例呼氣試驗陽性者HPS陽性率為100%(7/7)。(4)35例有消化不良症狀的患兒,進行HPS檢測後同步接受C¹³呼氣試驗27例,HPS陽性率為88.57%(31/35),呼氣試驗陽性率為25.93%(7/27),7例呼氣試驗陽性者HPS陽性率為100%(7/7)。(5)150例HPS陽性的誌願者,隨機分成兩組,治療組105例,接受我們Ameritek公司研發試生產的多聚賴氨酸複合體配製的漱口液和口腔噴霧劑治療2個月；對照組45例,未給於任何治療。治療組於治療結束後2周進行HPS複查,對照組同時接受檢測,治療組HPS陰轉率為81.91%(86/105),對照組無1例轉陰。

結果顯示:(1) 4組HPS檢測陽性率為73.02%_~88.57%,與多數報道相似^(17,20),支持唾液中存在高幽門螺杆菌檢出率現象。(2) 4組中經內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗、切片W-S銀染鏡檢、C¹³或C¹⁴尿素呼氣試驗陽性,證實有胃幽門螺杆菌感染患者,同步HPS檢測陽性率為70.15%_~100%。(3) 胃幽門螺杆菌感染合並口腔幽門螺杆菌感染患者,可影響PPI三聯7天療法的療效,且對口腔幽門螺杆菌感染的治療幾乎無效。(4) 多聚賴氨酸複合體配製的漱口液和口腔噴霧劑，對口腔幽門螺杆菌感染有明顯療效,HPS檢測陰轉率為81.91%,對照組無1例轉陰。

目前,雖然對口腔是幽門螺杆菌定植地之一,還是胃液返流造成口腔中出現幽門螺杆菌的問題,至今尚存在爭論,但是口腔內存在幽門螺杆菌已是不爭的事實。多數學者認為幽門螺杆菌僅寄居於人類,人與人之間的傳播是唯一的傳播途徑,口-口、胃-口傳播是主要的傳播方式,胃-口傳播可能是幽門螺杆菌隨脫落的胃上皮通過胃、食道返流入口腔,同時口腔中的幽門螺杆菌也可隨吞咽入胃。口腔粘膜與胃粘膜同屬消化係統,均來自外胚層，其結構、功能、生理、病理有許多相似之處，唾液腺特異性血凝素的存在，是幽門螺杆菌在口腔中寄生的原因。幽門螺杆菌利用其代謝產生的尿素酶分解尿素形成"氨雲",造成有利於幽門螺杆菌生存和繁殖的特殊生態學龕⁽²¹⁾。作者認為,口腔幽門螺杆菌感染,不但與牙周病、齲病、口腔複發性潰瘍、口腔扁平苔癬、口臭等口腔疾病有關，口腔很有可能確為幽門螺杆菌的胃外定植地,是胃幽門螺杆菌的重要儲存庫,可源源不斷的將幽門螺門杆菌伴隨唾液和食物吞咽到胃內,引起胃幽門螺杆菌病的發生和複發。

2.6 HPS檢測法的適應證: HPS檢測法采用的標本是唾液,適用於所有人群。體溫表式測試卡,將卡放置舌下吸取唾液即可進行檢測；測試板隻需收集唾液,可由醫務人員進行檢測；嬰幼兒及不能主動配合者,如能用塑料吸管吸取到唾液也可進行測試。HPS檢測法、ELISA檢測法都是從唾液中檢測幽門螺杆菌抗原,但ELISA檢測法需在有一定設備的實檢室進行。HPS檢測法主要用於檢查口腔幽門螺杆菌感染和胃幽門螺杆菌感染,可作為口腔疾病的一種常規檢查,也可作為消化科胃病和消化不良病因的篩選,亦可用於口腔和胃、特別是口腔幽門螺杆菌感染治療後的療效判定。

現在我把目前存在的主要檢測方法歸納為三大類別，並作一具體比較, 見表5-1

表5-1: 胃幽門螺旋杆菌臨床主要檢驗方法對比表
	胃鏡法	C¹⁴同位素呼氣法⁽²²⁾	HPS 唾液法^{(23,24,25,26)}
	胃鏡法	C¹⁴同位素呼氣法⁽²²⁾	HPS 唾液法^{(23,24,25,26)}
原理	檢出病理灶及進行標本生化或化學法測出螺旋杆菌	間接檢出螺旋杆菌抗原	間接檢出螺旋杆菌抗原
檢驗標本	病理切片	呼出氣體	唾液
精確度	病理切片精確度高,化學反應法精確度低,小病灶容易漏檢	精確度高(判斷患者是否有胃幽門螺旋菌感染)	精確度高, 同時判斷患者口腔和胃幽門螺旋菌感染
精確度	病理切片精確度高,化學反應法精確度低,小病灶容易漏檢	精確度高(判斷患者是否有胃幽門螺旋菌感染)	精確度高, 同時判斷患者口腔和胃幽門螺旋菌感染
特異性	高	高, 但對診斷毒性螺旋杆菌具有盲區	高
檢驗所需時間	數小時,病理報告數天	自服用同位素到呼出氣體需1小時	5-10分鍾
檢驗方法繁複	繁複	繁複	簡單
基礎設備費用	昂貴	昂貴	不需要
試劑費用	中等	昂貴	低
檢驗風險	中等	不安全	安全
病人接受程度	有害怕心理	病人害怕同位素	容易接受
對環境影響	無	有嚴重的環境汙染,同位素在人體內半衰期為7320年，全衰期為6萬年。	無
對環境影響	無	有嚴重的環境汙染,同位素在人體內半衰期為7320年，全衰期為6萬年。	無
適宜人群	不適宜孕婦兒童	不適宜孕婦、哺乳婦婦女和兒童	適用所有年齡段人群
檢驗方法專利情況	專利已過期	美國專利	美國,中國專利
檢驗方法專利情況	專利已過期	美國專利	美國,中國專利

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