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微生物法測定青黴素殘留量的研究



錄入時間:2010-10-26 13:38:23 來源:周口新聞網

【摘要】  目的 建立測定青黴素殘留量的微生物法。方法 利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用,采用管碟法對培養溫度、青黴素的最低檢測限及試驗用菌種ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量等條件進行研究。結果 培養溫度確定為28,青黴素的最低檢測限為0.008u/mg,試驗用菌種ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量為60mg/ml。結論 該方法靈敏度高,可用於青黴素殘留量的測定。

【關鍵詞】  管碟法; 青黴素殘留量; 含量測定

  Penicillin residue assay by microbiological method   
  ABSTRACT  Objective  To establish a microbiological method for penicillin residue assay.  Methods The parameters including culture temperature, limit of detection (LOD) of penicillin and the maximum tolerance dose of experimental strain ATCC9341a to streptomycin sulfate were detected by cylinderplate method. Results  The culture temperature was 28 and the LOD of penicillin was 0.008 u/ml, and the maximum tolerance dose of experimental strain ATCC9341a to streptomycin sulfate was 60 mg/ml.  Conclusion  This method was sensitive and can be used for penicillin residue assay.
   
  KEY WORDS  Cylinderplate method;  Penicillin residue;  Assay

  青黴素類藥物仍是目前常用的抗菌藥,但其過敏反應一直危害著患者的身體健康。美國聯邦法規中指出,若有相互汙染的可能性,非青黴素藥品應化驗是否含有微量青黴素;若能測出有微量青黴素存在,則本批藥品不可出售。本文以青黴素標準品,就微生物法測定青黴素殘留量的各影響因素進行了研究探討,建立了測定青黴素殘留量的微生物法。該方法靈敏度高,可用於青黴素殘留量的測定。

  試劑與材料

  1.1  試劑
   
  ChP培養基,USP培養基,1% pH6.0磷酸鹽緩衝液,1000u/ml青黴素酶溶液,藤黃八疊球菌ATCC9341a0.9%的氯化鈉溶液,青黴素標準品。

  1.2  儀器與用具
   
  生化培養箱(1540),超淨工作台,鋼管,鋼管放置器,培養皿。

  試驗方法

  2.1  菌液的製備
   
  將工作用菌種ATCC9341a的斜麵培養物,接種於USP號培養基斜麵,3235培養24h,用0.9%的氯化鈉溶液洗滌,用前用0.04u/ml的青黴素標準液標定,每100ml培養基中加菌量所致抑菌圈直徑1518mm為宜。

  2.2  雙碟平板的製備
   
  向已熔化並放置4050的培養基中加入適量ATCC9341a菌液,搖勻。取菌液10ml,加入已滅菌的雙碟中,待培養基凝固後,於每個雙碟中放入4枚小鋼管。

  2.3  培養基及培養溫度的選擇
   
  精密稱取青黴素標準品1520mg,用1% pH6.0磷酸鹽緩衝液稀釋至0.04u/ml的標準溶液,分別用ChP培養基,USP培養基製備雙碟平板,滴碟後室溫放置12h,分別於2837恒溫培養1618h,測定抑菌圈直徑。

  2.4  培養溫度對青黴素最低檢測限的影響
   
  精密稱取青黴素標準品1520mg,用1% pH6.0磷酸鹽緩衝液稀釋為0.0150.010.080.007u/ml。用“2.3”中選出的最佳培養基(ChP)製備雙碟平板,每個濃度至少滴加10個鋼管,滴碟後室溫放置12h,分別於2837恒溫培養1618h,測定抑菌圈直徑,計算平均值。

  2.5  試驗用菌種ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量等條件進行研究
   
  精密稱取硫酸鏈黴素250300350mg分別加入4ml 1% pH6.0磷酸鹽緩衝液和1ml青黴素酶溶液(1000u/ml),使成為706050mg/ml的硫酸鏈黴素溶液,用ChP培養基製備雙碟平板,滴碟後室溫放置12h,分別於2837恒溫培養1618h,測定抑菌圈直徑,計算平均值。

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  2.6  樣品中青黴素最低檢測限的確定
   
  精密稱取硫酸鏈黴素樣品適量,用1% pH6.0的磷酸鹽緩衝液稀釋,加入1u/ml青黴素標準溶液使成為下列幾種濃度的溶液:
   
  溶液A:含50mg/ml硫酸鏈黴素並含0.015u/ml青黴素;
   
  溶液B:含50mg/ml硫酸鏈黴素並含0.005u/ml青黴素;
   
  溶液C:含50mg/ml硫酸鏈黴素並含0.004u/ml青黴素。
   
  用ChP培養基製備雙碟平板,滴碟後室溫放置12h,分別於2837恒溫培養1618h,測定抑菌圈直徑,計算平均值。

結果

  3.1  培養基及培養溫度試驗
   
  結果見表1

  3.2  培養溫度與青黴素最低檢測限關係
   
  結果見表2

  3.3  試驗用菌種ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量
   
  測試結果見表3

  3.4  樣品中青黴素最低檢測限的確定
   
  結果見表4

  結論與討論
   
  (1)ChP培養基與USP培養基均可使用,但培養溫度在2837擴散效果好。
   
  (2)青黴素的最低檢測限在28下為0.008u/ml,在37下為0.015u/mlFDA資料顯示在2630培養,最低檢測限為0.01u/ml。檢驗過程中適當
       
  表1        培養基及培養溫度的試驗結果 略
   
  表2    培養溫度及青黴素最低檢測限的研究結果 略
   
  表3    試驗用菌種ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量的測試結果 略

  表4      樣品中青黴素最低檢測限的確定結果 略
   
  (3)FDA資料中給出的ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量為50mg/ml,本文給出ATCC941a對硫酸鏈黴素的最大耐受量為60mg/ml
   
  (4)結果表明此方法靈敏度高,可用於測定青黴素殘留量。

【參考文獻】
 
  [1 FDA bylines VoL.8,No.3,Nov.1977

  [2 CFR Penicillin activity. 1976436.104

  [3 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[S. 北京:化學工業出版社,2005:附錄

  [4 United state pharmacopeial Covention,Inc. The United states pharmacopeia USP 27.NF22 S. Rockville,MD: United states pharmacopeia,2004:2163

 

 

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