2、細菌保存於含有甘油的培養物中：
（1）在液體培養基中生長的細菌培養物：取0.85ml細菌培養物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養物使甘油分布均勻，然後轉移到標記好的保存管內，密封，在乙醇－幹冰或液氮中凍結後再轉至－70度長期保存。在複蘇時，用滅菌接種針刮取凍結的培養物表麵，然後立即把黏附於接種針上的細菌劃於含適當抗生素的LB瓊脂平板表麵，於37度過夜。
（2）在瓊脂平板上生長的細菌培養物：從瓊脂平板表麵刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內，再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB培養基，振蕩使甘油完全分布均勻後，分裝於無菌保存管內，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優點在於可用於保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。
如果甘油與培養基混合後凍存在一般冰箱的冰凍室裏，不能反複複蘇使用，而且如果甘油含量太低，凍結成冰塊，複蘇效果不佳。一般都使用甘油終濃度為30%。
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