酵母總RNA提取方法

錄入時間:2010-11-1 9:05:21 來源：生命經緯知識庫

熱酚法抽提酵母RNA

(1) 將酵母細胞培養在3ml選擇性培養基中，30℃過夜旋轉培養。

(2) 稀釋過夜培養的菌液，重新在10ml培養基中培養細胞。

(3) OD600達到1.0時，收菌，4000rpm/min離心5min,棄培養基。

(4) 將細胞懸浮於400μl AE緩衝液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 調整pH值至5.2）。

(5) 加入1/10體積的10% SDS，充分混合。

(6) 加入等體積在65℃預熱的酸性酚（pH4.5），混合。

(7) 65℃加熱5min，冰上放置10min。

(8) 在室溫下8000rpm/min離心10min。

(9) 取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min離心8min。

(10) 取水相，加入等體積氯仿/異戊醇（49∶1）10000rpm/min離心8min。

(11) 加入1/10體積3M pH5.2的醋酸鈉，2.5倍體積的純乙醇，-20℃過夜沉澱。

(12) 沉澱樣品於4℃離心5min，去除液體。

(13) 在冰上幹燥RNA（放置15min），最後用適量DEPC水溶解RNA。