沙門氏菌是食品微生物中致病菌的一種,下麵介紹幾種檢測沙門氏菌的方法。
1、傳統的培養方法
用於沙門氏菌分析的傳統方法是食物樣品分步增菌,以增加病原的可檢出率,共有如下四步: ( 1 )預增菌,將樣品加到培養基中,溫度
2、 以核酸為基礎的方法
所有的細胞都含有DNA和RNA這樣唯一一類可攜帶信息的大分子,所以用它作為檢測的標靶。 標靶通常是一個特異性核酸序列,它可通過以補體核酸分子作為探針來檢出。探針需要加附適當的標記,此法應用的探針含有放射性同位素標記的傷寒沙門氏菌DNA片段, 其敏感性高,經約48小時的增菌步驟後, 檢測極限可達1 08個細菌/m l 。目前,以核酸雜交為基礎的第二代技術——比色計目前也已發展起來,此法依賴於沙門氏菌核糖體 RNA( rRNA) ——核糖體發育過程中儲存的核酸成分的檢測。核糖體是細胞蛋白質合成器的一部分,每個細菌細胞中存在5000 ~ 20000個複製體,而相比之下染色體 DNA複製體僅 2 ~10個。 這種天然富含r RNA標靶序列的情況使得用無輻射計檢測成為可能,同時又保持了與放射性同位素方法相當 或更高的敏感性。
3、以抗體為基礎的檢測方法
利用抗原——抗體反應的特異性,進行細菌的鑒別和血清學定性。細菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在,使得人們可以建立一些快速方法來檢測以食品為載體的病原。廣泛采用的是以雙位點ELISA技術即夾心ELISA為基礎的方法。此法是指以固定在固體基質上的“捕捉”抗體來捕捉目標抗原,經洗滌除去未結合的成分,加入第二種酶標抗體,此者結合在捕捉到的抗原的不同位點上,第二次洗滌後加入酶作用基質,並令其與顏色成分反應,然後用分光光度法即很容易檢測到目標抗原。采用微量滴定板作為固態基質使反應形式標準化,並促成其自動化。
ELISA法檢出沙門氏菌的極限範圍在105-106個細胞/ml,因此,要得出可靠的結果,食物樣品首先必須進行預增菌、選擇性增菌,通常還要在含有D一甘露糖的肉湯( M肉湯) 中進行後增菌,以促進鞭毛發育。標準的ELISA法樣品製備,經40 ~ 48 小時的孵育才能完成。目前國內口岸係統已應用微量板ELISA法對進出口動物產品進行沙門氏菌檢測。該法采用預先包被了沙門氏菌( A- E群) 單克隆抗體的微量板,加入經增菌處理的樣品,反應後再加入一定的指示劑, 作用畢後用酶標儀測定OD值來判定結果,微量板ELI SA法樣品製備過程分三步,共耗時24小時。( 1 ) 選用營養肉湯進行預增菌6小時,使“致傷”、冷凍的沙門氏菌複蘇。( 2)使用選擇性培養基RV進行增菌14小時,使沙門氏菌大量繁殖,同時抑製其它雜菌生長。(3) 使用營養肉湯( 蛋白腖水) 進行後增菌4小時,使沙門氏菌的數量大大增加。
4、快速檢測方法
(1)平板檢測方法。第一階段,在小孔內加入樣品和抗體聯合物,孵育期間,沙門氏菌抗原和包被抗體形成了一種複合物:包被單克隆抗體——沙門氏菌抗原——抗體聯合物。洗滌後,通過每孔加入基質溶液 ( 過氧化脲) 和色素原溶液( 四甲基氨基丙苯) 來顯示上述複合物 :酶催化色素原的氧化,結果產生藍色。加入反應終止液終止催化反應,並使反應混合物酸化,顏色由藍變黃。( 2 ) 卡片檢測法。 此法以單步免疫反應即夾心型免疫色譜反應為基礎。反應固相包括一塊用“抗沙門氏菌抗體——染料”偶合物浸透的染料襯墊和一張薄膜條,抗沙門氏菌抗體就固定在薄膜的反應區上。增菌後,增菌肉湯用移液管加到樣品小孔內並令其吸收, 如樣品存在沙門氏菌抗原,它們會與偶合物作用,然後依次遷移到膜上,與固定在膜上反應區的抗體結合,在反應窗上呈現一條色帶。最後結果可在 5 ~ 7秒內讀取。
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