培養基母液的配製方法

1.了解無菌操作
2.掌握培養基母液的配製方法

二、實驗原理

配製培養及時，為了使用方便和用量準確，通常采用母液法進行配製，即將所選培養基配方中各試劑的用量，擴大若幹倍後再準確稱量，分別先配製成一係列的母液置於冰箱中保存，使用時按比例吸取母液進行稀釋配製即可。

三、實驗器材和藥品

器材：電子天平、燒杯、容量瓶、細口瓶、藥勺、玻璃棒、電爐。
藥品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、煙酸、鹽酸吡哆醇(維生素B6)、鹽酸硫胺素 (維生素B1)、甘氨酸。

四、實驗步驟

1、大量元素母液的配製

各成分按照表1培養基濃度含量擴大10倍用天平稱取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。後用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細口瓶，貼好標簽保存於冰箱中。配製培養基時，每配1L培養基取此液100ml。

表1 MS培養基大量元素母液製備

注意：
(1) 配製大量元素母液時，某些無機成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發生化學反應，產生沉澱物。為避免此現象發生，母液配製時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解後才能混合，混合時應注意先後順序。特別應將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最後單獨加入，在溶解CaCl2·2H2O 時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉澱。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。

2、微量元素母液的配製

MS培養基的微量元素無機鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素用量較少，特別是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配製中分微量Ⅰ、Ⅱ配製。按照表2，表3配方，用電光天平稱量，其它同大量元素。配製培養基時，每配製1L培養基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。

表2   MS培養基微量Ⅰ的配製

 表3   MS培養基微量Ⅱ的配製

 注意：
使用電子分析天平時注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以後，用吸耳球將天平內的髒物清理幹淨。

3、鐵鹽母液的配製

鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，隻需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩定，不易發生沉澱。配製方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配製培養基時，配製1L取此液10ml。

表4 MS鐵鹽母液的配製

 注意：
在配製鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成FeS04和Na2-EDTA 鼇合不徹底，此時若將其冷藏，FeSO4會結晶析出。為避免此現象發生，配製鐵鹽母液時，FeSO4和Na2-EDTA 應分別加熱溶解後混合，並置於加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調pH值至5 .5，室溫放置冷卻後，再冷藏。

4、有機母液的配製

MS培養基的有機成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養基中的有機成分原則上應分別單獨配製。配製直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時用電子分析天平。配製培養基時，每配1L培養基取此液5ml。

注意：
由於維生素母液營養豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類汙染的維生素母液，有效濃度降低，並且易給後期培養造成傷害，不宜再用。避免此現象發生的方法是:配製母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，並貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。

表5   MS培養基有機物質母液的製備

 5、激素母液配製

植物組織培養中使用的激素種類及含量需要根據不同的研究目的而定。一般激素母液的配製的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：

(1)配製生長素類，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然後用蒸餾水定容到一定的濃度。

(2)細胞分裂素，例如KT，應先用少量95%乙醇或無水乙醇加3~4滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。

(3)配製生物素，用稀氨水溶解，然後定容。

注意：
所有的母液都應保存在0~4℃冰箱中，若母液出現沉澱或黴團則不能繼續使用

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