微量接種菌落計數法測定抗生素後效應的影響因素探討

  [摘要］　目的:探討微量接種菌落計數法測定抗生素後效應(PAE)的影響因素。

        方法:通過實驗比較離心洗滌法和稀釋法消除藥物的差異、確定接種區域最 適宜的菌落數範圍以及氯化三苯四氮唑(TTC)的適宜濃度，並結合文獻對其他有關影響因素進行評述。

      結果:兩種除藥方法所測得的PAE無明顯差異。接種區域菌落數以選擇10～10 0 cfu為宜。TTC的適宜濃度為10 μg^．ml^-1。

結論:應用微量接種菌落計數法測定PAE時應控製有關影響因素。

［ABSTRACT］　OBJECTIVE：To investigate factors affecting det ermination of PAE.METHODS：Using micro-inoculation colony counting method,compar ison with method for removal of drug,the optimal counts range of cfu from inocul ation and MIC of TTC were made.Other factors,which could affect PAE,have been re viewed.RESULTS：There were no significant variations between washing an d dilution method for removal of drug.TTC at the concentration of 10 μg^．ml ^-1 was the optimal.10～100 cfu in the counting area was preferred.CONCLUSIONS：When using micro-inoculation colony counting metho d to investigate the PAE,the optimal condition should be controlled.

 抗生素後效應(Postantibiotic effect,PAE)是評價抗菌藥物藥效學和製定給藥方案的重要 指標之一。PAE的測定常在體外進行。我們曾建立了微量接種菌落計數法測定PAE^［1］ ，此法簡便易行。關於PAE的影響因素，國內外已有評述^［2.3］，本文主要通過實驗並結合文獻對微量接種菌落計數法測定PAE的幾個主要影響因素進行探討，為在一般醫院條件下開展PAE的研究提供參考。

1　關於細菌與抗菌藥物的接觸

　　細菌與抗菌藥物接觸是產生PAE的基本前提。抗菌藥物的種類、藥物濃度、細菌接觸量、接觸時間等均可影響體外PAE的測定結果。眾所周知，不同種類抗菌藥物的作用機製不同，對同一類細菌的PAE值也不同^［2～4］，同一類抗菌藥物的不同藥物對細菌的PAE值也有 明顯差異^［5.6］。
　　PAE值與抗菌藥物濃度有著一定的關係^［3］。一般而論，氨基糖苷類、喹諾酮類藥物與PAE呈濃度依賴性，β-內酰胺類藥物僅呈部分濃度依賴性，而有的抗菌藥物僅在高於MIC 以上才可產生PAE，如大環內酯類抗生素。據報道^［4］，應用菌落計數法測定不同濃 度(1MIC～16MIC)的7種抗菌藥物對大腸埃希氏菌的PAE。其中，四環素、氯黴素、利福平在接近MIC時可產生PAE，隨著濃度增高，在8MIC時PAE達最大值；氨苄西林在高達8MIC時才出現PAE，在濃度增高時PAE值不再增大；而慶大黴素在2MIC時才測得PAE，在較高濃度時，由 於其快速而強大的殺菌作用會導致測定失敗。因此，在進行PAE測定時，應根據各類藥物安 排不同的藥物濃度(一般應從1/2MIC開始遞增)，以探討PAE與藥物濃度的相關性。
　　關於抗菌藥物與細菌接觸時間，一般認為接觸時間越長，PAE值越大。常采用接觸時間為1 h 或2 h。有人認為，細菌接觸抗菌藥物的濃度較接觸時間更為重要^［3］。
　　PAE可因接觸的菌量不同而有所改變，因此，控製試驗菌的濃度是重要的。多數研究資料表 明，菌液濃度10⁶ cfu^．ml^-1為宜。試驗可按以下操作：試驗菌種轉種於MH肉湯(MHB)中37℃培育過夜，菌懸液於580 nm波長處測定吸光度，使吸光度控製在0.25左右，此 菌懸液濃度約為10⁸ cfu^．ml^-1。以MHB稀釋10倍後，取1.0 ml加入9.0 ml 含抗菌藥物的MHB中，其最終濃度即為10⁶ cfu^．ml^-1。

2　關於抗菌藥物的消除

　　抗菌藥物與細菌接觸一定時間後需予以消除。抗菌藥物的消除是測定PAE的重要步驟之一。 常用離心洗滌法、稀釋法或酶滅活法^［3］。據報道^［4］，稀釋法與離心洗滌法對青黴素G作用於金葡菌ATCC 6538P，以及酶滅活法與稀釋法對氨苄西林作用於肺炎鏈球菌的PAE的影響，均未發現明顯差異。我們探討了離心洗滌法和稀釋法對PAE測定的影響，以慶大黴素(1，4MIC)與大腸埃希氏菌ATCC 25922、金葡菌ATCC 25923接觸1 h， 分別以上述兩種方法消除藥物，按微量接種菌落計數法描記細菌生長曲線，並計算PAE值。 

注：^*1TTC在瓊脂平板中的濃度，^*2表內數字表示生長受抑製的菌株 數。

表 2　接種菌落數對菌液濃度測定的影響( ±s,n=8)

注：^*1由實測菌落數及稀釋倍數計算得出的ATCC 25923待測菌液的濃度。

參考文獻：
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